目的:通过探究OLFML2A对胶质瘤细胞侵袭、迁移和自噬的影响,揭示OLFML2A促进胶质瘤自噬、侵袭和迁移的分子机制。筛选并鉴定特异性互作的蛋白,明确两者相互作用的生物学功能及对GBM的影响。方法:1.通过TCGA和GTEx患者信息数据库,分析OLFML2A在胶质瘤患者中的表达。收集胶质瘤患者临床标本,分析OLFML2A的表达差异与胶质瘤患者预后的关系。2.以U251、U87-MG为研究对象,使用慢病毒敲减或过表达OLFML2A,采用细胞划痕、Transwell小室、透射电镜分析OLFML2A对GBM细胞迁移速度、侵袭能力和自噬水平的影响,通过Western Blot检测上皮细胞-间充质转化（Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT）蛋白标志物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和自噬相关蛋白标志物LC3、P62、ATG5、Beclin1的表达变化,加入自噬激活剂雷帕霉素,观察自噬在GBM侵袭和迁移中的作用。3.构建过表达Flag-OLFML2A融合蛋白的U251、U87-MG细胞系,使用蛋白免疫沉淀（IP）、质谱（MS）检测、免疫共沉淀（CO-IP）筛选鉴定与OLFML2A具有潜在互作关系的蛋白分子。使用来源于TCGA数据库的胶质瘤患者信息和临床样本,分析互作蛋白与OLFML2A表达相关性,探索互作蛋白的临床意义。4.构建互作蛋白敲减和过表达的GBM细胞系,采用细胞划痕、Transwell小室、透射电镜、Western Blot观察互作蛋白在GBM细胞自噬、侵袭和迁移中的作用。5.构建敲低OLFML2A与过表达互作蛋白的U87-MG、U251细胞系,进行功能回复实验,通过透射电镜、Western Blot细胞划痕、Transwell小室研究OLFML2A影响GBM侵袭和迁移的机制。6.构建裸鼠皮下移植瘤模型和裸鼠颅内原位移植瘤模型,种植OLFML2A与互作蛋白差异表达的U87-MG细胞,通过测量肿瘤大小,病理和免疫组织化学染色,结合小鼠生存分析,观察肿瘤侵袭、迁移和自噬相关蛋白的变化。结果:1.与正常脑组织及癌旁组织相比,OLFML2A在胶质瘤中的表达明显上调,且表达水平与胶质瘤的级别呈正相关。高表达OLFML2A的胶质瘤患者总体生存时间明显缩短,OLFML2A的表达与患者的预后显著相关。2.细胞划痕实验、Transwell小室实验结果表明:与对照组相比,过表达OLFML2A的GBM细胞划痕愈合速度显著增加,细胞的侵袭和迁移速度明显加快。透射电镜及LC3融合蛋白实验显示过表达OLFML2A显著促进了GBM细胞的自噬水平。该现象可以通过敲减OLFML2A发生逆转。此外,OLFML2A抑制了E-cadherin的表达,促进了N-cadherin、Vimentin及自噬相关蛋白P62、ATG5、Beclin1的表达,同时LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值明显增大。3.雷帕霉素可以有效促进GBM细胞的自噬水平。在敲减OLFML2A的U87-MG、U251细胞中联合使用雷帕霉素,雷帕霉素可以逆转因OLFML2A表达降低引起的细胞侵袭和迁移速度的减缓。4.通过IP、MS和CO-IP筛选鉴定,初步确定HSPA6是OLFML2A潜在的互作蛋白。其次,通过TCGA和GTEx数据库和临床标本发现OLFML2A与HSPA6的表达呈正相关,且HSPA6的表达水平随肿瘤级别的升高而上调,其表达水平与患者预后相关。5.通过细胞划痕、Transwell小室发现,HSPA6对GBM细胞侵袭和迁移的影响与OLFML2A是一致的,即HSPA6同样可以促进GBM细胞的侵袭、迁移及自噬水平。6.在敲减OLFML2A的同时过表达HSPA6,结果显示:与对照组相比,敲减OLFML2A可以抑制GBM细胞的侵袭、迁移和自噬。过表达HSPA6促进了GBM细胞的侵袭、迁移和自噬,并且可以逆转敲减OLFML2A造成的影响。7.体内实验表明,OLFML2A和HSPA6在体内促进了肿瘤的生长,小鼠生存分析发现两者的表达均与小鼠的总生存时间明显相关。免疫组化结果显示,OLFML2A与HSPA6均可以在体内抑制E-cadherin的表达,促进N-cadherin、Vimentin及自噬相关蛋白P62、ATG5、Beclin1的表达。结论:OLFML2A在体内外通过上调HSPA6的表达,激活自噬,促进GBM细胞的侵袭和迁移。OLFML2A和HSPA6可能是改善GBM患者预后的新的治疗靶点。