小肠移植是除了全静脉营养以外不可逆肠衰竭患者的另一种重要治疗方式。随着早期急性排斥反应得到有效的控制，慢性排斥反应正逐渐成为影响小肠移植患者和移植肠远期存活的重要因素。目前单纯应用免疫抑制剂不能有效预防和治疗慢性排斥反应，因此，探求其他治疗方法是目前器官移植研究方向之一。n-3多不饱和脂肪酸(PUFAs)是一类具有调节炎症反应和免疫应答作用的脂肪酸，在动脉粥样硬化、糖尿病和自身免疫性疾病等多种疾病预防和治疗方面发挥作用。本课题利用大鼠原位小肠移植慢性排斥模型，研究n-3 PUFAs对慢性排斥移植肠的保护作用，并探讨HMGB1(high mobility group box1，高迁移率族蛋白1)和RAGE(receptor foradvanced glycation end product，晚期糖基化终产物受体)在移植肠系膜血管病变中表达变化和n-3 PUFAs对其影响。　　第一部分长期存活的大鼠原位小肠移植慢性排斥模型的建立　　大鼠是研究小肠移植的常用实验动物。过去我们曾经成功建立F344到Lewis大鼠原位和异位小肠移植慢性排斥模型。对于研究移植肠慢性排斥反应，原位模型比异位模型有明显优势，但是受体鼠远期存活率常受多个因素影响，包括移植肠血管吻合口远期通畅率和原位移植肠慢性排斥反应。我们希望通过改进手术方式和提高免疫抑制疗效的方式来延长受体鼠存活时间，建立能长期存活的大鼠原位小肠移植慢性排斥模型。　　我们对以往采用的F344到Lewis大鼠小肠移植模型进行血管吻合方式等方面外科技术改进，提高血管吻合口远期通畅率。我们还用他克莫司代替环孢霉素延缓受体鼠移植肠慢性排斥病程。通过这些改进，绝大多数受体鼠术后存活时间达到半年，病理学检查证实移植肠出现慢性排斥病变，包括:肠粘膜萎缩、粘膜下肌层纤维化、炎症细胞浸润、系膜纤维化和血管内膜增生。　　结论:通过改进手术方式和应用他克莫司，首次建立了术后存活半年的F344到Lewis大鼠原位小肠移植慢性排斥模型。　　第二部分 n-3多不饱和脂肪酸对大鼠慢性排斥移植肠影响　　过去研究表明n-3 PUFAs作为免疫调节剂可以减轻移植器官急性排斥反应，延长移植物存活时间。近年来我们研究发现给小肠移植大鼠喂食富含n-3 PUFAs的鱼油能显著减轻移植小肠慢性排斥反应，提示n-3 PUFAs对小肠移植慢性排斥有一定疗效。但是由于受到研究条件限制，我们仍缺少关于n-3 PUFAs对移植肠慢性排斥远期疗效方面的资料。本部分研究将针对这一问题进行动物实验研究。　　我们利用第一部分研究中所建立的大鼠原位小肠移植慢性排斥模型进行本部分研究。我们观察了术后给受体鼠灌食富含n-3 PUFAs鱼油(FO组)半年后脂质代谢血清学指标和移植肠病理学指标，并与灌食磷酸缓冲液的PBS组、灌食富含n-6PUFAs玉米油的CO组和Lewis到Lewis同系移植的ISO组三个对照组比较。结果发现从术后13周开始FO组受体鼠体重平均增长率显著高于PBS组，术后半年外周血红细胞膜脂肪酸中n-6/n-3 PUFAs比例明显低于PBS组，血清胆固醇水平也明显降低，移植肠慢性排斥病变改变明显好于PBS组。然而，CO组受体鼠术后17-20周表现出体重下降、精神萎靡、食量减少和粪便减少或腹泻等表现，检查外周血红细胞膜脂肪酸中n-6/n-3 PUFAs比例明显高于PBS组，血清胆固醇水平无明显改变，移植肠慢性排斥病变明显加重，各项指标达到中—重度水平。ISO组移植肠没有慢性排斥病变。　　结论:通过术后半年观察证实了n-3 PUFAs能改善大鼠移植小肠慢性排斥病变，还发现长期给予n-6 PUFAs可能会加重移植小肠慢性排斥反应。　　第三部分移植肠系膜血管病变中HMGB1和RAGE表达的变化及n-3多不饱和脂肪酸的影响　　移植肠系膜血管病变表现为弥漫性系膜血管内膜增生性病变，是移植肠慢性排斥反应的典型病理学表现之一。第二部分研究已经证实n-3 PUFAs能显著改善大鼠移植肠系膜血管病变，但具体分子机制有待探讨。HMGB1是一种高度保守的核蛋白，属于内源性损伤相关分子模式分子(damage-associated molecular pattern molecules)，生理条件下主要存在于细胞核内，病理条件下被释放到细胞外，与Toll受体(Toll-likereceptor)和RAGE结合。Toll受体和RAGE受体属于模式识别受体(pattern-recognitionreceptor)，它们介导的非特异性炎症反应除了参与动脉粥样硬化和糖尿病血管病变，还可以加强特异性移植排斥反应。本部分研究将探讨HMGB1和RAGE在移植肠系膜血管病变中变化和意义以及n-3 PUFAs对其影响。　　我们通过组织免疫荧光技术和蛋白免疫印迹技术分析了第二部分研究中各组移植大鼠移植肠系膜血管中HMGB1和RAGE表达变化。结果发现PBS组HMGB1和RAGE表达显著高于ISO组，FO组HMGB1和RAGE表达显著低于PBS组，而CO组与PBS组比较无明显改变。另外，我们还利用胶原酶消化和贴壁筛选法成功从移植肠系膜中分离出血管内皮细胞，通过细胞免疫荧光技术分析了各组移植肠系膜血管内皮细胞中HMGB1和RAGE表达变化。结果HMGB1和RAGE在内皮细胞中表达情况与在移植肠系膜血管中表达情况相吻合。　　结论:在肠系膜血管病变中HMGB1和RAG表达量升高，提示它们可能参与移植肠系膜血管病变过程。n-3 PUFAs能抑制移植肠系膜血管病变中RAGE和HMGB1表达，这可能与n-3 PUFAs对移植肠系膜血管的保护作用有关。