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目的 为进一步研究抗炎合剂在治疗脓毒症(热毒互结证)的效果和作用机制,本课题通过细胞毒性研究探讨抗炎合剂对LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7的炎症反应中HMGB1/TLR4/My D88信号通路的调控作用,通过随机、对照临床研究探索和讨论抗炎合剂治疗脓毒症(热毒互结证)患者的临床疗效和对HMGB1/TLR4/My D88信号通路的影响。方法 临床研究:将西医诊断符合脓毒症,中医证型诊断符合热毒互结证的患者随机分成两个组:治疗组、对照组,治疗组采用中西医结合治疗法,即常规西医治疗加用抗炎合剂中药汤剂;对照组则仅采用西医常规治疗。观察两组患者在治疗前、治疗后3天、7天的中医证候评分的变化、血细胞分析(白细胞和中性粒细胞)、CRP水平、肝肾功能、炎症因子IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10、TNF-α和APACHE II评分的变化,采用ELISA检测法观测两组患者在治疗前、治疗后3天和治疗后7天血清中HMGB1、TLR4、My D88水平变化。实验研究:使用抗炎合剂对SD大鼠灌胃7日后腹主动脉采血,提取含药血清;HMGB1过表达慢病毒、HMGB1 RNAi慢病毒感染RAW264.7建立HMGB1过表达慢病毒、HMGB1 RNAi慢病毒稳定株;将RAW264.7分为7组:PBS空白组、LPS处理组、LPS+含药血清组、HMGB1过表达+LPS组、HMGB1过表达+含药血清+LPS组、HMGB1 RNAi+LPS组、HMGB1 RNAi+含药血清+LPS组。ELISA法检测各组细胞上清TNF-α、IL-6、IL-10水平,采用RT-PCR法检测各组细胞TLR4m RNA、My D88 m RNA、NF-κB m RNA表达量。结果 临床研究:治疗组在治疗7天后的临床疗效明显优于对照组治疗7天后的疗效(P<0.05),治疗组的总有效率为93.103%,对照组的总有效率为78.571%;治疗组在治疗后3天、7天的中医证候总评分、便秘评分、怕热心烦评分及腹胀评分较明显低于对照组(P<0.05);治疗组在治疗后3天、7天的促炎因子水平IL-1、IL-6、TNF-α显著低于对照组(P<0.05)。和对照组相比,治疗组中的抗炎因子IL4、IL-10水平显著增加(P<0.05);治疗组在治疗后3天、7天HMGB1、TLR4、My D88含量显著低于对照组(P<0.05);治疗组治疗后7天APACHE II评分显著低于对照组(P<0.05)。实验研究:LPS处理组细胞上清促炎因子IL-6、TNF-α水平高于空白组(P<0.05),LPS+含药血清组、HMGB1+含药血清+LPS组和HMGB1 RNAi+含药血清+LPS组细胞上清促炎因子IL-6、TNF-α水平低于LPS处理组、HMGB1+LPS组和HMGB1 RNAi+LPS组(P<0.05),HMGB1+LPS组细胞上清促炎因子IL-6、TNF-α水平高于LPS处理组,HMGB1 RNAi+LPS组细胞上清促炎因子IL-6、TNF-α水平低于LPS处理组(P<0.05);LPS处理组细胞上清抗炎因子IL-10水平高于空白组(P<0.05),LPS+含药血清组、HMGB1+含药血清+LPS组和HMGB1RNAi+含药血清+LPS组细胞上清抗炎因子IL-10水平高于LPS处理组、HMGB1+LPS组和HMGB1 RNAi+LPS组(P<0.05),HMGB1+LPS组细胞上清抗炎因子IL-10水平高于LPS处理组,HMGB1 RNAi+LPS组细胞上清抗炎因子IL-10水平低于LPS处理组(P<0.05)。LPS处理组细胞TLR4 m RNA、My D88m RNA和NF-κB m RNA表达量高于空白组(P<0.05),LPS+含药血清组、HMGB1+含药血清+LPS组和HMGB1 RNAi+含药血清+LPS组细胞TLR4 m RNA、My D88m RNA和NF-κB m RNA表达量低于LPS处理组、HMGB1+LPS组和HMGB1RNAi+LPS组(P<0.05),HMGB1+LPS组细胞TLR4 m RNA、My D88 m RNA和NF-κB m RNA表达量高于LPS处理组,HMGB1 RNAi+LPS组细胞TLR4 m RNA、My D88 m RNA和NF-κB m RNA表达量低于LPS处理组(P<0.05)。结论 临床研究:西医治疗基础上加用抗炎合剂在改善中医证候疗效上明显优于单纯西医治疗,且在改善发热、便秘、怕热心烦、腹胀等症候方面有优势;可见,抗炎合剂治疗脓毒症(热毒互结证)具有较好的临床疗效,其可下调HMGB1、TLR4、My D88水平,进而下调促炎因子,上调抗炎因子,调节炎症反应失衡,起到对机体的保护作用。实验研究:抗炎合剂对LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7的炎症反应具有调节作用,其机制可能与其可以下调HMGB1、TLR4、My D88和NF-κB有关,上调抗炎因子,下调促炎因子,调节免疫反应,以减轻炎症反应对细胞的损伤。