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本课题以植物凝集素（lectin）为研究对象，通过对大豆凝集素（SBA）和植物血细胞凝集素（PHA）的提取、测定和灭活研究以及在昆明种小鼠上的毒性实验，建立了lectin的实验室快速测定方法，探讨了lectin的热敏性及灭活方法以及lectin的对动物的影响和作用机理。 试验一研究了lectin的分离提取与纯化。采用亲和色谱法（affinity chromatography），以N-乙酰-D氨基半乳糖为亲和吸附剂，Epoxy-Sephaose为载体，N-乙酰-D氨基半乳糖-Epoxy-Sephaose为固定相，pH7.2的PBS为流动相对大豆凝集素进行分离纯化。将大豆抽提液吸附于经PBS预平衡亲和色谱柱后，先用PBS流洗至蛋白峰为基线(OD280nm＜0.01)，然后用含0.2M半乳糖的0.9％盐水洗脱收集洗脱液，将OD280nm大于0.2的各管合并、透析、冰干后即得纯化的SBA。纯化产物经pH8.9（胶浓度7.5％）聚丙烯酰胺凝胶电胶，考马斯亮篮染色，显示出一条着色深的蛋白质着色带。 试验二研究了lectin的测定方法。研究了lectin的血细胞凝集活性与其浓度的关系，探讨了试样粉碎粒度、脱脂方法、脱脂时间、抽提时间、抽提次数等测定条件对测定结果的影响。发现lectin的活力与浓度之间存在高度线性相关（R2=0.9999）。血凝法测定饲料中lectin的含量时，其理想测定条件为，样品粉碎过40日、样品与30～60℃石油醚或乙醚比例（W／V）1：8脱脂8小时、样品与生理盐水（W／V）1：8抽提8小时。在上述条件下测定，回收率可达88％～102％。经过对8种不同的饲料及原料样品lectin含量的测定，平均相对偏差（％）为0.9～2.4，变异系数CV（％）为1.3～3.3。葫泣J人·笋/&l关·笋夕诊广 试验二测定了PHA对小鼠的L05。。以18一249体重的健康昆明种小鼠为试验动物，在室温、清洁、笼养、白由采食条件卜，进行真胃灌注PHA，随机分组（雌雄各1，=）进行了二次。第一次分5组，每组10只小白鼠进行真胃灌注，接毒剂量为0.5一smg/只（25250mg/kgBW）;第二次分3组，每组3只小自鼠进行真胃灌注，接毒剂最分别为10一3Omg/只（0 .5一1.59/kgBw）;第二次分3组，每组3只小白鼠进行真胃灌注，其接毒剂最分别为1003O0mg/只（5159/k 9 BW）。观察7日后，二次试验的试验组小鼠均无死亡，最高剂量达15000m留kg，表明PHA对小鼠无急性毒性。 实验四研究了lectin的灭活方法。分别用干热、湿热、酸碱和金属离子四种方法处理人豆植物蛋自中的人豆凝集素（S BA），探讨了理化处理对SBA活性的影响。120℃以卜的干热处理不能使SBA的活力明显丧失:而95oC、3Omin，一00oC、20min或一05oC、一omin的湿热处理，可使SBA的活力完全丧失。在pH 1 .04.5或pHg一13范围内提取人豆蛋白质，可使SBA的活力显著丧失。人豆蛋白抽提液中三价、四价金属离子和部分二价、一价金属离子也可显著降低SBA的活力。 综上所述，利用亲和色谱法可以获得纯度较高的lectin;采用血凝法可以较快速、简便地测定饲料中的lectin;PHA对小鼠无致死毒性:在不影响人豆蛋自质品质的条件卜，干热处理不能除去大豆中的SBA，适宜的湿热、酸碱和金属离子处理能有效钝化大豆中SBA的活性。