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鸡球虫病是严重危害养禽业发展的重要疾病之一，危害比较严重主要有柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫4个种，临床上往往为这4个种的混合感染，因此研制抵抗这4种鸡球虫混合感染的多价疫苗显得十分迫切，本实验室已经构建了抵抗4种球虫的混合多价DNA疫苗和多价多表位DNA疫苗，初步显示了良好的免疫保护效果，为进一步提高多价DNA疫苗的免疫保护效果，本研究对混合多价DNA疫苗的配比进行了优化，对多价多表位DNA疫苗的免疫程序和稳定性进行了研究，如下:
本研究第一部分首先在对四种鸡艾美耳球虫免疫调节型DNA疫苗pVAX1.0-TA4-IFN-γ、pVAX1.0-NA4-IL-2、pVAX1.0-Em8-IL-2和pVAX1.0-3-1E-IFN-γ混合免疫程序基础上，对其免疫剂量的最佳配比再进行筛选。将柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)免疫调节型DNA疫苗pVAX1.0-TA4-IFN-γ、毒害艾美耳球虫(E.necatrix)免疫调节型DNA疫苗pVAX1.0-NA4-IL-2、巨型艾美耳球虫(E.maxima)免疫调节型DNA疫苗pVAX1.0-Em8-IL-2和堆型艾美耳球虫(E.acervulina)免疫调节型DNA疫苗pVAX1.0-3-1 E-IFN-γ按5μg∶5μg∶5μg∶5μg、10μg∶25μg∶25μg∶10μg、15μg∶35μg∶35μg∶15μg、20μg∶50μg∶50μg∶20μg的剂量混合后免疫雏鸡，试验对各配比剂量设计了感染柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫和四种混合感染各5个试验组及相应的5个非免疫攻虫对照组与一个非免疫非攻虫对照组，共26组。结果发现免疫剂量混合组15μg∶35μg∶35μg∶15μg组在减少E.tenella、E.necatrix、E.acervulina和四个虫种种混合的免疫保护效果最好，ACI分别为188.50，180.50，180.91和174.59。免疫剂量混合组10μg∶25μg∶25μg∶10μg组对E.maxima感染组的免疫保护效果较好，ACI为181.69。
本研究第二部分是将本实验室构建的免疫调节型多价多表位DNA疫苗pVAX1-TA4-1-NA4-1-LDH-2-EMCDPK-1-IL-2进行免疫程序筛选，在此基础上再进行稳定性实验。主要包括以下几个方面:
1四种鸡艾美耳球虫免疫调节型多价多表位DNA疫苗免疫剂量的筛选
将免疫调节型多价多表位DNA疫苗pVAX1-TA4-1-NA4-1-LDH-2-EMCDPK-1-IL-2分别以2μg、10μg、25μg、50μg、100μg、200μg免疫雏鸡，各剂量分别设计了感染柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫各4个试验组及相应的4个非免疫攻虫对照组与一个非免疫非攻虫对照组，共29组。结果发现，柔嫩艾美耳球虫组免疫保护效果最好的免疫剂量为25μg，ACI为184.5。毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫免疫保护效果最好的免疫剂量均为10μg，ACI分别为184.58、181.27、181.48。
2四种鸡艾美耳球虫免疫调节型多价多表位DNA疫苗免疫途径的筛选
将免疫调节型多价多表位DNA疫苗pVAX1-TA4-1-NA4-1-LDH-2-EMCDPK-1-IL-2分别以肌肉注射、静脉注射、皮下注射、口服、滴鼻滴眼五个途径免疫雏鸡，各途径分别设计了感染柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫各4个试验组及相应的4个非免疫攻虫对照组与一个非免疫非攻虫对照组，共25组。结果发现，各免疫攻虫组中腿部肌肉注射组ACI均最高。其中腿部肌肉注射攻柔嫩艾美耳球虫组ACI为183.24;攻毒害艾美耳球虫的ACI为184.76;攻巨型艾美耳球虫ACI为181.96;攻堆型艾美耳球虫ACI为174.79。腿部肌肉注射组免疫效果优于其他免疫途经组。
3四种鸡艾美耳球虫免疫调节型多价多表位DNA疫苗首免日龄和免疫次数的筛选
设计了一周龄首免不加强免疫、一周龄首免二周龄加强免疫、二周龄首免不加强免疫和二周龄首免三周龄加强免疫四个实验组，分别免疫DNA疫苗pVAX1-TA4-1-NA4-1-LDH-2-EMCDPK-1-IL-2。各程序设计了感染柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫各4个试验组及相应的4个非免疫攻虫对照组与一个非免疫非攻虫对照组，共21组。结果发现，加强免疫组比非免疫组免疫保护效果好，所有加强免疫组的ACI都大于160;二周龄首免组比一周龄首免组免疫保护效果好，二周龄首免三周龄加强免疫组效果最好。
4四种鸡艾美耳球虫免疫调节型多价多表位DNA疫苗免疫稳定性实验
将免疫调节型多价多表位DNA疫苗pVAX1-TA4-1-NA4-1-LDH-2-EMCDPK-1-IL-2分别在不同的温度(-20℃、4℃和室温)下分别保存1个月、3个月、6个月，分别免疫雏鸡，各温度组分别设计了感染柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫各4个试验组及相应的4个非免疫攻虫对照组与2个非免疫非攻虫对照组，共42组。结果发现，所有免疫组的ACI都大于160，说明各保存条件下多价多表位DNA疫苗都具有免疫保护效果，且在三个不同温度和不同保存时间内能保持相对稳定性。