伏马菌素是由串珠镰刀菌产生的一类能广泛污染粮食及其制品的真菌毒素,具有多种毒性,对人和动物健康产生严重威胁。本研究旨在为建立一种基于基因工程单链抗体的检测伏马菌素B1的方法提供前期基础,以便最终快速有效地检测粮食和饲料中FB1的含量。本研究以购买的伏马菌素B1纯品为基础,由于FB1是小分子半抗原,所以需要将其与大分子载体蛋白交联才能成为完全抗原。分别利用戊二醛一步法和二步法将伏马菌素B1与BSA和KLH两种载体蛋白偶联起来,制备得到FB1-BSA和FB1-KLH两种人工抗原,FB1-BSA作为免疫抗原,FB1-KLH作为检测抗原。抗血清效价测定结果证明这两种抗原均制备成功。用FB1-BSA免疫Balb/c小鼠,加强免疫后测定免疫小鼠抗血清效价,ELISA测定结果显示效价达到要求。处死并解剖小鼠后,取脾脏提取总RNA,反转录获得cDNA第一链,以其为模板进行PCR扩增得到抗体重链可变区和轻链可变区基因(VH, VL),然后进行组装和扩增得到单链抗体基因。将scFv基因克隆到噬菌体载体pCANTAB 5E上后,构建噬菌体抗体库,然后经过噬菌体表面展示技术进行淘选得到了一株可产生较高亲和力scFv的噬菌体单链抗体株,并进行了scFv的可溶性表达和鉴定。