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目的 构建人抗HBsAg单链抗体基因，在真核细胞和原核细胞中进行表达，并对其表达产物的活性进行鉴定。 方法 以从噬菌体抗体库中筛选获得的抗HBsAg的Fab抗体基因为模板，分别扩增出其轻、重链可变区（VL、VH）基因，通过重组PCR方法将轻、重链可变区基因用连接肽（Gly4Ser）3的编码序列连接，并引入前导肽编码序列，构建具有L-VH-Linker-VL结构的单链抗体基因。 将所构建的单链抗体基因克隆入绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-N3，瞬时转染COS-7细胞，分析其表达情况。稳定转染Jurkat细胞，建立稳定表达ScFv融合蛋白的细胞系，并分析其表达产物的活性。 将获得的不含前导肽的单链抗体基因克隆入HA和6His融合的原核表达载体pTAT-HA，在大肠杆菌BL21中进行表达，分析其表达情况。表达产物并经NiNTA柱纯化后，分析其活性。 结果 经测序表明，前导肽、连接肽、V。及V。的序列正确，经酶切鉴定证实成功地构建了绿色荧光蛋白基因融合表达载体。瞬时转染COS刁细胞后，通过荧光显微镜观察、间接免疫荧光检测、免疫组化检测证实了SCFV融合蛋白的表达。稳定转染 Jurkat细胞，经 G4筛选，建立了稳定表达 ScFv融合蛋白的细胞系。建系细胞裂解产物和浓缩的培养上清经SDS－PAGE及Western Blot分析，证实了ScFv融合蛋白的分泌性表达。间接ELISA检测证实所表达的单链抗体具有与HBSAg结合的特异性。建系细胞培养上清与肝癌细胞作用后，经荧光显微镜观察、间接免疫荧光及流式细胞仪检测进一步确定表达的SCFV融合蛋白具有与HBSAg特异性结合的活性。 经酶切鉴定证实原核表达载体pTAT爿ASCFV构建成功。在大肠杆菌BLZI中实现了 SCFV融合蛋白的表达。经 Ni－NTA柱纯化获得纯化产物，经间接ELISA分析确定所得产物具有与HBSAg结合的特异性。与肝癌细胞作用后，通过间接免疫荧光检测、免疫组化捡测进一步确定所获得的纯化产物具有与HBSAg特异性结合的功能。 结论 门)成功地构建了五种人抗HBSAg单链抗体基因。Q)瞬时转染COS7细胞，获得了分泌性表达。稳定转染Jurkat细胞，经筛选获得稳定表达SCFV融合蛋白的细胞系，并证实表达产物具有与HBSAg特异性结合的功能。（3）在大肠杆菌 BLZI中进行表达，经 Ni－NTA柱纯化获得了纯化产物，并证实纯化产物具有与HBSAg特异性结合的功能。