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目的Daam1是蓬乱蛋白相关形态形成活化因子1或称形态发生紊乱关联激活因子1,为形成素蛋白家族的成员。Daam1是WNT/PCP通路的组成因子之一,此通路参与原肠胚形成以及细胞骨架重排等生理过程,在胚胎癌细胞系F9中,KristiLaMonica等人观察了壁层内胚层的迁移并证明了PCP通路通过Rho/ROCK调控内胚层细胞的迁移。抑制PCP通路中的Daam1的表达不但能够引起迁移细胞数量增加,也能导致细胞定向障碍。有活性的的Daam1能够抑制细胞的定向障碍。目前,关于Daam1在肺癌组织中的表达与肿瘤的恶性程度,组织学分型及侵袭转移能力之间的关系均不清楚。本研究通过检测肺腺癌、肺鳞癌及癌旁组织中的的Daam1的表达情况,分析其与临床病理因素的关系,探讨Daam1在肺癌发生发展中的作用。并通过检测不同侵袭能力肺癌细胞系的Daam1表达水平,研究它们与组织学分型的关系,进一步验证Daam1在肺癌中的表达及与肺癌组织学类型的关系。材料与方法1、Western Blot39例新鲜肺癌及相应癌旁组织标本,均取自中国医科大学附属医院2007年-2008年间行外科手术切除的肺癌患者标本。人肺巨细胞癌细胞系BE1(高侵袭能力亚型)、LH7(低侵袭能力亚型)、人肺腺癌细胞系A549,人肺腺癌细胞系SPC、人肺腺癌细胞系LTE及人支气管上皮细胞系HBE,为本实验室冻存。提取组织与细胞的蛋白,采用考马斯亮蓝法进行蛋白定量。取等量蛋白,进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和转印,一抗(anti-Daam1 1:200稀释,anti-β-actin 1:500稀释)和辣根过氧化物酶标记二抗(1:2000稀释)孵育,ECL发光。以β-actin为内对照,结果判定为PVDF膜上出现灰色条带,并对条带进行灰度值测定。2、RT-PCR37例新鲜肺鳞癌,腺癌,及相应癌旁组织取自中国医科大学附属医院2007年-2008年间手术切除的标本。人肺巨细胞癌细胞系BE1(高侵袭能力亚型)、LH7(低侵袭能力亚型)、人肺腺癌细胞系A549,人肺腺癌细胞系SPC、人肺腺癌细胞系LTE及人支气管上皮细胞系HBE,为本实验室冻存。提取组织与细胞的mRNA,用紫外分光光度计测定RNA的浓度,并用RNAnase flee H20将RNA浓度稀释成500ng/ul后,逆转录获得cDNA,测量并调节cDNA浓度,进行PCR,PCR扩增产物经溴化乙啶(EB)染色,凝胶成像系统(BioImageing System,UVP,CA)下观察。以β-actin为内对照,计算Daam1的相对平均表达量。3、统计分析应用SPSS13.0统计软件分析数据,P<0.05为有统计学意义。结果1、Daam1在肺癌和癌旁肺组织中的表达对39例新鲜肺鳞癌、腺癌和癌旁组织进行Western Blot分析,结果显示:Daam1在肺鳞癌、腺癌和癌旁正常肺组织中均有表达,分子量约为123kDa,但在癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.01)。对37例新鲜肺鳞癌、腺癌和癌旁组织进行RT-PCR分析,结果显示:Daam1在肺鳞、腺癌和癌旁正常肺组织中均表达,分子量为235kDa,但在癌组织中的表达明显高于癌旁组织。(P=0.032)。2、Daam1蛋白在肺癌细胞系和人支气管上皮细胞系中的表达Daam1蛋白在5种肺癌细胞系及人支气管上皮细胞系中均表达,但在肺癌细胞系中Daam1的蛋白表达量高于正常人支气管上皮细胞,肺巨细胞癌细胞系BE1、LH7、人肺腺癌细胞系LTE的Daam1蛋白表达量明显高于人肺腺癌细胞系A549,人肺腺癌细胞系SPC、及人支气管上皮细胞系HBE。经两两比较,BE1、LH7、LTE和HBE之间表达Daam1蛋白的差异均具有统计学意义。3、Daam1 mRNA在肺癌细胞系和人支气管上皮细胞系中的表达Daam1mRNA在5种肺癌细胞系及人支气管上皮细胞系中均表达,但在肺癌细胞系中Daam1mRNA的表达量高于正常人支气管上皮细胞,以肺巨细胞癌细胞系低侵袭能力亚型LH7 Daam1 mRNA表达量最高,其次依次为肺巨细胞癌细胞系高侵袭能力亚型BE1、人肺腺癌细胞系LTE、人肺腺癌细胞系SPC、最后为腺癌细胞系A549和人支气管上皮细胞系HBE。除人肺腺癌细胞系A549与人支气管上皮细胞系HBE表达Daam1 mRNA的差异无统计意义(P=0.299)以外,经两两比较,各肺癌细胞系与HBE、以及各种肺癌细胞系之间表达Daam1 mRNA的差异均具有统计学意义。然后,我们又采用了倍比稀释的方法进一步验证了Daam1 mRNA在各种细胞系中的表达情况。并对肺癌细胞系及人支气管上皮细胞系中表达的Daam1 mRNA、蛋白进行了Pearson相关分析,统计结果显示Daam1 mRNA、蛋白在这六种细胞系中的表达具有相关性(r=0.778,p<0.01)。结论1、Daam1 mRNA、蛋白在肺癌组织中的表达高于癌旁肺组织。2、Daam1 mRNA、蛋白在肺癌细胞系中的表达高于支气管上皮细胞。3、Daam1mRNA、蛋白在肺癌细胞系及HBE中的表达具有相关性(r=0.778,p<0.01)。4、Daam1 mRNA、蛋白在低侵袭能力肺癌细胞中的表达高于高侵袭能力的肺癌细胞系。