人参皂苷Rg3对HT-29结肠癌细胞株MMP-9和TIMP-1表达的影响的实验研究

来源 :浙江中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mipanglin
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目的:  研究人参皂苷Rg3对HT-29结肠癌细胞株基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase9,MMP-9)mRNA和组织金属蛋白酶抑制物-1(tissue inhibitor of metalloproteinase1,TIMP-1)mRNA表达的影响及采用MTT法测定人参皂苷Rg3对HT-29结肠癌细胞的抑制率,从而探讨人参皂苷Rg3抑制肿瘤细胞侵袭、转移的机制。  方法:  体外培养人结肠癌细胞株HT-29细胞。用高剂量(100μg/ml)、中剂量(50μg/ml)和低剂量(25μg/ml)人参皂苷Rg3培养HT-29细胞24小时、48小时、72小时。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测MMP-9 mRNA和TIMP-1 mRNA表达情况。采用MTT法检测人参皂苷Rg3对肿瘤细胞的抑制率。统计采用SPSS14.0软件包,两因素析因方差分析,并多重比较。检验水准以P<0.05作为有显著性差异,P<0.01作为有非常显著性差异。  结果:  1.RT-PCR方法检测Rg3对HT-29细胞MMP-9 mRNA表达的情况,方差分析,24小时组:对照组与低、中剂量组相比,无统计学差异(P>0.05、P>0.05),与高剂量组相比,有显著的统计学差异(P<0.01);48小时组:对照组与低、中、高剂量组相比均有显著的统计学差异(P<0.05、P<0.01、P<0.01);72小时组:对照组与低、中、高剂量组相比均有显著的统计学差异(P<0.01、P<0.01、P<0.01)。低剂量组:24小时组与48小时、72小时组相比,有显著的统计学差异(P<0.01、P<0.01),48小时组与72小时组相比,无统计学差异(P>0.05);中、高剂量组:24小时组与48小时组相比,无统计学差异(P>0.05),24小时组、48小时组与72小时组相比,有显著的统计学差异(P<0.01、P<0.01)。提示人参皂苷Rg3可以抑制HT-29细胞MMP-9 mRNA的表达,抑制作用随着剂量的增加及时间的延长而增强。  2.RT-PCR方法检测Rg3对HT-29细胞TIMP-1 mRNA表达的情况,方差分析,24小时组:对照组与低剂量组相比,无统计学差异(P>0.05),与中、高剂量组相比,有显著的统计学差异(P<0.01、P<0.01);48小时组和72小时组:对照组与低、中、高剂量组相比均有显著的统计学差异(P<0.01、P<0.01、P<0.01)。低剂量组:24小时组与48小时组相比,无统计学差异(P>0.05),24小时组与72小时组相比,有显著的统计学差异(P<0.01),48小时组与72小时组相比,有显著的统计学差异(P<0.05);中、高剂量组:24小时组与48小时组、72小时组相比,有显著的统计学差异(P<0.01、P<0.01),48小时组与72小时组相比,有显著的统计学差异(P<0.01)。提示人参皂苷Rg3可以促进HT-29细胞TIMP-1 mRNA的表达,促进作用随着剂量的增加及时间的延长而增强。  3.MTT法检测人参皂苷Rg3对肿瘤细胞的抑制率,方差分析,24小时组:低剂量组与中剂量组相比,无统计学差异(P>0.05),低、中剂量组与高剂量组相比,有显著的统计学差异(P<0.01、P<0.01);48小时组,低剂量组与中、高剂量组相比,有显著的统计学差异(P<0.01、P<0.01),中剂量组与高剂量组相比,无统计学差异(P>0.05);72小时组:低剂量组与中、高剂量组相比均有显著的统计学差异(P<0.01、P<0.01),中剂量组与高剂量组相比,有显著的统计学差异(P<0.01)。低、中、高剂量组:24小时组与48小时组、72小时组相比,有显著的统计学差异(P<0.01、P<0.01),48小时组与72小时组相比,有显著的统计学差异(P<0.01)。说明人参皂苷Rg3对HT-29细胞生长的抑制作用与药物浓度及作用时间呈正相关。  结论:  1.抑制MMP-9的表达,促进TIMP-1的表达,是人参皂苷Rg3抗肿瘤的机制之一。在一定的药物浓度和作用时间范围内,人参皂苷Rg3对HT-29细胞表达MMP-9 mRNA有抑制作用,并且随着药物浓度的增加及时间的延长,抑制作用增强;对HT-29细胞表达TIMP-1 mRNA有促进作用,并且随着药物浓度的增加及时间的延长,促进作用增强。  2.人参皂苷Rg3具有抑制肿瘤细胞生长的作用。在一定的药物浓度和作用时间范围内,人参皂苷Rg3对HT-29细胞生长的抑制作用与药物浓度及作用时间呈正相关。
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