超声微泡介导双报告基因在椎间盘髓核中表达的实验研究

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背景基因治疗椎间盘退变疾病日益引起人们关注,多种载体介导基因转染的研究在体内和体外都取得了一定的结果,但真正安全、高效并能应用于临床的载体仍需大量研究。目的探索外源性基因能否在超声微泡介导下转染SD大鼠椎间盘细胞。设计、时间及地点随机对照动物实验。2008年3月——2008年12月在重庆医科大学医学分子生物学实验室完成。方法40只SD大鼠被随机分为4组。第1组仅于髓核内注入含双报告基因(含有绿色荧光蛋白和萤火虫荧光素酶编码片段)的质粒;第2组为在第1组基础上加超声照射;第3组同时注入含双报告基因的质粒和微泡的混悬液;第4组为在第3组基础上加超声照射。每只大鼠未接受手术和照射的第4、5椎间盘作为对照。主要观察指标一周后处死大鼠,取出全部椎间盘组织做荧光素酶活性检测,针对GFP的mRNA做PCR扩增,做病理切片用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达。结果荧光素酶活性检测显示:第4组即超声+微泡+质粒组(96.7×103±72.3×103)荧光素酶活性最高,与第1组(8.7×103±7.2×103)、第2组(3.1×103±2.4×103)、第3组(47.5×103±43.3×103)比较,差异有统计学意义(P<0.01);PCR结果显示第4组标本中GFP获得了最高的表达,而在质粒+超声组合的第3组表达量最低;荧光显微镜下观察,四个实验组的荧光强度变化趋势与荧光素酶活性检测结果和PCR结果一致。结论超声微泡介导的基因转染系统能促进外源基因在髓核中的表达,为今后椎间盘病变的基因治疗提供了实验方法和依据。
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