【摘 要】
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目的：构建HIV-1SF2株env基因C1区与C3区嵌合片段的克隆并在大肠杆中表达，以便对其表达蛋白的结构和功能进行进一步研究。 方法：用DNAstar软件辅助设计引物，以含有HIV-1SF2株前
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目的：构建HIV-1SF2株env基因C1区与C3区嵌合片段的克隆并在大肠杆中表达，以便对其表达蛋白的结构和功能进行进一步研究。 方法：用DNAstar软件辅助设计引物，以含有HIV-1SF2株前病毒基因组的9B1R6质粒为模板，PCR法分别扩增出env基因C1和C3段；两个片段经Kpn Ⅰ酶切、T4连接酶连接和扩增后，再将经EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ酶切的嵌合片段插入表达载pGEX-4T-2中，使插入片段位于谷胱甘肽S-转移酶（GST）读码框架下游的多克隆酶切位点（MCS），构建重组表达质粒pGEX-4T-2/C1C3；重组质粒经酶切、测序鉴定后，以TSS法转入大肠杆菌DH5α，IPTG诱导表达融合蛋白，最后经SDS-PAG电泳分析表达蛋白图谱。 结果：经酶切和测序分析，插入片段读码框架正确，无碱基错配，表明成功构建pGEX-4T-2/C1C3克隆；重组克隆在大肠杆菌DH5α中经IPTG诱导，高效地表达出相对分子质量（Mr）为43×103的融合蛋白。 结论：重组质粒pGEX-4T-2/C1C3的构建和表达成功，为进一步研究该表达蛋白的活性和HIV疫苗的研制奠定了基础。
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