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目的:通过对桃红四物汤水提物体内外成分定性分析,进一步明确桃红四物汤发挥作用的主要物质基础;联合网络药理学与转录组学技术,深入探究桃红四物汤治疗缺血性中风的作用机制。方法:本实验应用UPLC-Q-TOF-MS~E技术结合UNIFI数据分析平台对桃红四物汤水提物中的主要化学成分进行了定性分析;建立大鼠脑缺血模型,灌胃给药桃红四物汤,应用UPLC-Q-TOF-MS~E技术结合桃红四物汤体外化学成分分析结果,鉴定大鼠口服桃红四物汤后入血、入脑原型成分及其代谢产物;以体内原型成分为基础,通过网络药理学预测桃红四物汤作用靶点,筛选出与缺血性中风疾病相关的靶点进行GO分析、KEGG通路注释,构建体内成分-靶点-通路可视化网络;应用转录组学测序方法,筛选出桃红四物汤治疗缺血性中风的差异基因,最后与网络药理学预测结果相结合,选定桃红四物汤可能发挥作用的关键靶点与通路进行动物实验验证。结果:在桃红四物汤水提物中共鉴别出90个化学成分,主要包括黄酮类、有机酸类、糖苷类和苯酞类等化合物;在脑缺血模型大鼠体内共鉴别出39个原型成分和61个代谢产物,原型成分中有18个化合物可以进入脑脊液;网络药理学共预测出桃红四物汤体内成分作用靶点437个,与缺血性中风疾病相关靶点有189个,KEGG注释的通路有105条;转录组学通过高通量RNA测序技术分析了假手术、脑缺血模型和桃红四物汤给药大鼠大脑左半球的mRNA表达谱,共鉴定出1007个桃红四物汤作用靶点基因,富集的通路有16条(Homo sapiens);网络药理学与转录组学交集的基因有11个,分别为:Plau、Fabp4、Mmp9、Mmp12、Cfd、Lcn2、Trem1、Lgals3、Hmox1、Selp和Slc6a4,交集的通路有7条,分别为:Focal adhesion、Complement and coagulation cascades、Staphylococcus aureus infection、Malaria、Transcriptional misregulation in cancer、Progesterone-mediated oocyte maturation、PI3K-Akt signaling pathway。动物实验验证表明,桃红四物汤可以逆转脑缺血后11个靶基因的异常表达、抑制补体和凝血级联通路的活化,进而实现对缺血性中风疾病的保护作用。结论:本实验建立的UPLC-Q-TOF-MS~E技术结合UNIFI数据库分析方法可以快速、较全面地识别桃红四物汤的体内外化学成分,以网络药理学与转录组学相结合的研究模式,确定了桃红四物汤治疗缺血性中风主要物质基础为Mudanpioside E、paeoniflorin、Lactiflorin、Benzoylpaeoniflorin、β-Benzoyloxypaeoniflorin等,作用机制可能与调控Complement and coagulation cascades、Cell cycle、Neuroactive ligand–receptor Interaction等信号通路有关,初步阐明了桃红四物汤治疗缺血性中风的主要物质基础与作用机制。