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背景多药耐药(multidrug resistance, MDR)是导致白血病化疗失败的主要原因。多药耐药是指肿瘤细胞接触一种抗癌药物后产生的对多种结构和功能迥异的抗癌药物的耐受性。目前认为它的发生机制是复杂多样的,主要有：(1)多药耐药相关基因(如MDR1、MRP1、BCRP、LRP等)表达的上调；(2)凋亡相关基因(如BCL-2、BCR／ABL、P53等)表达的异常；(3)酶介导的耐药,包括谷光甘肽转移酶表达升高、DNA拓扑异构酶Ⅱ的含量或活性降低；(4)增强的DNA修复功能；(5)微环境耐药。其中以肿瘤细胞过度表达MDR-1基因编码的ABC转运蛋白超家族成员膜P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp, P-170, MDR1, ABCB1)为主要的机制。黏附分子CD44是一种细胞表面跨膜糖蛋白,作为透明质酸(HA)的受体,CD44分子的表达与白细胞的粘附、血管发生、细胞增殖、分化、迁移及淋巴细胞的活化、归巢,以及免疫细胞在炎症部位迁移和凝集有关。近年来,许多学者提出CD44在正常髓细胞生成过程中发挥重要作用,CD44在造血细胞的过表达预示着血液系统恶性疾病预后不良。Vincent T等发现CD44分子与其受体HA之间的相互作用可能会影响恶性血液病细胞的存活及耐药性。RNA干扰是利用双链RNA(double-stranded RNA, dsRNA)诱导序列特异的转录后基因沉默(posttranscriptional gene silencing)现象,由于其高效性,高特异性,高稳定性,可遗传性及RNAi在有效地沉默靶基因的同时,对细胞本身的调控系统没有影响等这些特点,越来越受到人们的重视。本研究以K562／A02细胞为研究对象,以RNAi技术为平台研究CD44基因与耐药细胞株K562／A02耐药性的关系,为逆转白血病多药耐药提供新的方法与思路。目的构建针对CD44基因的RNA干扰表达质粒载体,探讨CD44基因表达抑制对白血病多药耐药细胞株K562／A02耐药性及生物学活性的影响。方法根据CD44基因表达序列设计有效的RNA干扰片段,将其构建入质粒表达空载体中,获得针对CD44 mRNA的特异性siRNA真核质粒(pGCsiRNA-CD44),转染K562／A02细胞。用实时荧光定量RT-PCR检测K562／A02细胞CD44,MDR-1和BCL-2 mRNA的表达；MTT法检测阿霉素对K562／A02细胞的半数抑制浓度(IC50)；流式细胞术(FACS)检测细胞周期；Hoechst33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化。结果针对CD44基因的siRNA真核质粒可有效沉默K562／A02细胞的CD44基因：与对照组相比,转染了4条pGCsiRNA-CD44质粒的K562／A02细胞CD44表达均明显抑制,以转染了siCD44-1的细胞中抑制最强。转染pGCsiRNA-CD44质粒48h后,K562／A02细胞CD44 mRNA水平下降64.1%(p<0.05),同时MDR-1,BCL-2 mRNA的表达量较对照组分别下降了25.6%,50.8%；K562／A02细胞IC50为(17.97±1.61)μg／ml,无义序列质粒转染后阿霉素对K562／A02细胞的IC50为(16.95±1.72)μg/ml,pGCsiRNA-CD44转染后IC50明显降低(8.77±1.63)μg／ml(p<0.01)。转染48h后,G0／G1期细胞比例提高了10.7%,细胞出现核固缩、核边集、凋亡小体等改变。结论特异性CD44siRNA可显著抑制K562／A02细胞CD44基因的表达,抑制细胞的增殖,诱导其凋亡,并有效逆转K562／A02细胞的多药耐药性。