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树突状细胞(Dendritic cells,DC)是目前已知的功能最强的专职抗原递呈细胞，具有刺激初始T细胞增殖的独特功能。成熟DC可将抗原递呈给T细胞，从而激活T细胞，启动免疫应答。人们对于免疫应答调控的研究历来非常重视，因为免疫应答是否能有效启动或控制在一定程度内，直接关系到机体对外界侵害的抵抗作用，或与免疫性疾病的发生有关。除了T和B细胞的负性调控外，近年来对于在免疫应答中已完成了抗原递呈功能的DC的调控作用及机制特别是负性调控方式及机制开始关注并进行研究。已有报道，用抗原体外冲击荧光标记的DC，然后与转有相应抗原的特异TCR基因的T细胞一起回输至小鼠体内，48小时后，在淋巴结内找不到荧光标记的DC。体外实验证实，在抗原存在的情况下，DC与抗原特异性的CD4+ T细胞混合培养后，短时间内即可检测到DC凋亡,提示DC在活化T细胞的同时，亦受到来自于T细胞的作用，引起自身的凋亡，以有效地下调免疫应答。DC是通过何种方式来诱导凋亡而实现负性调控的？对此问题的回答，目前的研究，主要集中在两个方面：Fas系统和 MHCⅡ类分子，但并没有取得确切的结论。所以，为进一步阐明这一问题，我们分别从这两个方面入手，对活化的T细胞可能引起DC凋亡的因素进行了初步探究。本文主要分以下两部分内容。一、Fas信号对DC成熟和抗原递呈功能的促进作用及其信号传导机制活化后细胞死亡（Activation-induced cell death, AICD）是机体调控免疫反应、防止其过度活化的一种主要机制。TNF受体超家族成员包括Fas是其中重要的介导分子。但是，DC是否可以通过Fas诱导凋亡，一直处于争议之中。我们用Fas的特异性的激活性抗体Jo-2处理DC，观察了Fas信号对DC的表型及功能的影响，并对其机制进行了初步探讨。结果发现，虽然DC表面表达Fas,但是，无论是非成熟DC还是成熟DC, 激活性抗Fas抗体Jo-2均不能诱导其凋亡。相反，Jo-2可以促进DC表型的成熟包括 MHCⅠ、Ⅱ类分子和共刺激分子表达的上调以及功能的活化包括分泌IL-1(及内吞功能、刺激同种异体T细胞增殖功能、抗原递呈功能的增强。我们检测了caspase1的活化情况，发现，caspase1在Jo-2作用0.5小时后即可被活化，而且，泛caspase抑制剂ZVAD-fmk和caspase1的特异性抑制剂 Ac-YVAD-CMK都可以抑制IL-1(的产生，同时也抑制了DC表型的变化，说明Jo-2是通过活化caspase1，促进了IL-1(的分泌。因为已有报道，IL-1(可以诱导DC成熟，因此，我们推测，Jo-2是在IL-1(的作用下，间接地引起DC发生表型及功能的变化。另外，我们对可能被Fas活化的信号分子进行了筛选，发现，ERK抑制剂PD98059 可以抑制Jo-2作用后IL-1(的分泌及表型变化，表明ERK参与<WP=6>了Jo-2刺激DC分泌IL-1(的过程。用RT-PCR方法，检测胞内IL-1(的mRNA水平，发现与LPS的作用不同，Jo-2不能活化IL-1(基因的表达。提示我们，DC将抗原递呈给T细胞并活化T细胞后，T细胞表达FasL, 与DC表面的Fas 结合，活化ERK和caspase1,迅速诱导IL-1(的分泌，从而进一步活化DC, 增强DC的功能，使T细胞充分活化和增殖，对免疫应答起正调控作用。另外，我们检测到NF-(B的活化, 用抑制剂PDTC抑制其活化，并不影响Jo-2作用后IL-1(的分泌及表型变化，表明刺激IL-1(分泌的信号传导通路与NF-(B的活化无关。但是，抑制NF-(B的活化可以造成DC对Fas诱导凋亡的敏感性增高，表现为R123低标记细胞的增加,说明Jo-2通过NF-(B的活化向DC传递存活信号。我们的结果表明，在DC，Fas系统并不向胞内传递凋亡信号，而是活化信号：它可以促进DC的表型成熟和功能活化。二、IFN-(与抗MHC Ⅱ类分子抗体联合诱导DC活化后死亡尽管有报道提出某些MHCⅡ类分子抗体可以诱导DC凋亡，但我们分别用两种已报道的可诱导凋亡的 MHCⅡ类分子抗体2G9或抗MHC Ⅱ 类分子抗体处理DC, 多次实验均未发现凋亡的发生。因为DC诱导T细胞活化后可促进其分泌IFN-(,可能参与DC的负调控。所以，我们用IFN-(预处理一定时间后，再用抗 MHCⅡ类分子抗体抗MHC Ⅱ 类分子抗体作用DC，发现可以诱导DC的凋亡。而且，凋亡的DC为CD86阳性细胞，凋亡后CD86表达下调，这可能与其功能相适应：CD86阳性为成熟DC,在它完成抗原递呈功能之后，适应性地下调CD86的表达，发生凋亡。由于 MHCⅡ类分子抗体可以引起DC的聚集，IFN-(预处理后聚集增强,我们设想，黏附分子是否参与了诱导凋亡的过程。有报道证实，CD18对HLA-DR引起的人单核细胞的凋亡很关键。但是，虽然DC表面也表达ICAM-1和LFA-1,抗CD18抗体阻断其接触却并不影响IFN-(和抗 MHCⅡ类分子抗体诱导的DC凋亡。泛caspase阻断剂ZVAD-fmk亦不能阻断DC的凋亡，提示IFN-(和抗 MHCⅡ类分子抗体诱导的DC凋亡为非caspase依赖性的。由于NO是诱导DC凋亡的原因之一，我们检测了IFN-(与抗 MHCⅡ类分子抗体联合作用后NO产生的变化，发现，IFN-(与抗 MHCⅡ类分子抗体联合作用后产生NO的水平并无明显增高，提示，NO不是引起IFN-(与抗 MHCⅡ类分子抗体联合作用诱导DC凋亡的原因。IFN-( 处理24小时后，加入抗 MHCⅡ类分子抗体抗体，作用不同时间后，I(B 的磷酸化程度无明显改变，，提示我们NF-(B 不参与IFN-(和抗 MHCⅡ类分子抗体诱导的DC凋亡?