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优雅蝈螽Ga,npsocleis gratiosa Brunner von Wattenwyl隶属于昆虫纲Insecta直翅目 Orthoptera螽斯科Tettigoniidae蝈螽属Gawipsocleis,广泛分布于我国的华北、东北和西北地区,个体较大,容易饲养,是研究螽斯科昆虫结构、功能和生理生化机制的模式物种。本文利用微分干涉相衬技术、免疫荧光技术、免疫电镜和透射电镜技术对优雅蝈螽精子形成过程中两种骨架蛋白的作用进行了研究,为进一步阐明细胞骨架在昆虫精子形成过程中的功能和分子机制奠定基础。 通过透射电镜技术对优雅蝈螽精子形成超微结构进行了观察,研究表明:优雅蝈螽精子顶体复合体由高尔基体衍生而来;精子形成早期,高尔基体与其分泌的原项体颗粒相互融合至原顶体,原顶体逐渐靠近细胞核并在核前端向两侧扩张,形成包括顶体本体、顶体和顶体外层的3层结构。细胞核内染色质进行重排,染色质由疏松状一纤维状一蜂窝状,最后形成致密的细胞核。轴丝出现在精子形成的早期阶段,线粒体由位于轴丝两侧慢慢向下方移动,并且逐步晶体化。 通过免疫荧光技术和免疫电镜技术对优雅蝈螽精子形成过程中两种骨架蛋白的动态变化进行了观察,研究表明:优雅蝈螽精子形成早期阶段,F一肌动蛋白富集于亚项体区域,形态由“球状”转变为“棒槌状”;精子形成的中期,F一肌动蛋白呈“倒Y型”分布于亚顶体区域和细胞核前端两侧;精子形成的后期,亚顶体区域的F一肌动蛋白解聚消失,F一肌动蛋白呈“箭头状”,仅分布于顶体复合体扩张的两翼中。未成熟精子尾部细胞质微滴中富含大量的F一肌动蛋白。 精子形成过程中,G-肌动蛋白分布于不同发育时期的细胞核,细胞核内染色质凝集过程中核内G-肌动蛋白较多;精子形成早期阶段,原项体中分布有大量的G-肌动蛋白;顶体复合体两翼结构形成后,G-肌动蛋白集中分布于两翼的骨架中;直至精子完全成熟,两翼骨架中的G-肌动蛋白消失。未成熟精子鞭毛尾部及颈部中心粒侧体均有G-肌动蛋白的分布。 精子形成的各个阶段,顶体复合体中、细胞核外周、中心粒侧体和尾部鞭毛轴丝、线粒体衍生体的外围都分布有微管蛋白。精子形成中期阶段,微管蛋白表达量较多,早期和后期阶段较少;成熟精子细胞核外周、线粒体衍生体的外围微管蛋白消失。另外在精子形成的中期阶段,细胞核和顶体复合体之间存在1个富含微管蛋白的结构,在精子形成的早期阶段和后期阶段并未见到。 综合分析微分干涉、免疫荧光、免疫电镜和透射电镜的研究结果,得出如下结论: 1.G-肌动蛋白和F一肌动蛋白在优雅蝈螽精子形成过程中均具有重要作用。①F一肌动蛋白的动态装配在精子顶体复合体形态构建和细胞核形变过程中起作用;F一肌动蛋白参与精子形成过程中多余细胞质的外排。②G-肌动蛋白作为精子细胞核基质的成份,参与精子细胞核浓缩过程中的染色质重排。 2.优雅蝈螽精子形成过程中,微管蛋白的基本作用是组成鞭毛的轴丝。此外,微管蛋白形成单体微管参与项体复合体形态构建、细胞核塑形以及线粒体衍生体的伸展。 本研究结果有助于从细胞和分子水平揭示昆虫雄性生殖细胞中特化细胞器的形成,有助于阐明成熟的、能受精的精子形成的分子机制。