重复缺氧预处理对小鼠缺血性脑卒中的保护作用及相关机制研究

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本文从以下几部分进行论述:  第一部分 重复缺氧预处理对脑缺血梗死体积及神经功能缺损的影响  目的:研究重复缺氧预处理对之后两周进行光化学脑梗死的小鼠缺血灶体积和神经功能的影响。  方法:C57BL/6J小鼠随机分成RHP组和Control组,每组10只。RHP组进行两周的重复缺氧预处理,对照组小鼠只进行泵入空气处理,预处理完成过两周进行光化学脑梗死造模。用尼氏染色法计算造模后第3天的梗死体积。用改良神经严重性量表(mNSS)评分和Corner试验检测小鼠在造模前1天和后1天、3天、7天、14天、21天及28天的神经功能。  结果:造模前两组小鼠均无神经功能缺损。造模后1天,神经功能缺损最严重,无明显差异。第3天到第28天,两组小鼠神经功能逐渐恢复,但总体RHP组评分均好于对照组,有显著差异(P<0.05),表明重复缺氧预处理可促进神经功能的恢复。RHP组第3天的梗死体积小于对照组,有显著差异(P<0.05)。  结论:重复缺氧预处理可减小两周后的脑缺血梗死体积,并促进神经功能恢复。  第二部分 重复缺氧预处理促进脑梗死后的神经再生和血管生成  目的:探讨重复缺氧预处理能否通过增强缺血性脑卒中后小鼠的神经再生、血管生成有助卒中后功能恢复、相关机制。  方法:C57BL/6J小鼠随机分成RHP组和Control组,给以RHP组两周的重复低氧处理,对照组给同样两周的泵入空气处理,两周后进行脑梗造模。用BrdU/DCX免疫荧光染色评估梗死7天时侧脑室室管膜下区新生的神经细胞,用DAPI/NeuN染色评估梗死周边区成熟神经元的存活数目,用BrdU/CD31双标评估梗死周边区的血管新生。卒中1天时,Western blot评估梗死周边大脑皮质内VEGF、BDNF、T-AKT、p-AKT表达情况。  结果:RHP组卒中7天时室管膜下区BrdU/DCX+细胞数显著高于对照组,梗死周边DAPI+/NeuN+细胞数及BrdU/CD31+细胞数也显著高于对照组。Western blot发现,RHP组p-AKT蛋白量显著高于对照组,p-AKT/T-AKT比值也高于对照组;BDNF及VEGF表达也高于对照组。  结论:卒中前两周给予重复缺氧预处理可通过增强AKT激酶磷酸化,增加脑内VEGF、BDNF早期表达等促进卒中后血管生成和神经再生,减少梗死周边区神经元丢失,保护缺血后的大脑。
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