海藻中存在着大量具有各种生物活性的寡糖类物质,这些寡糖因具有抗氧化、抗癌、抗病毒、抗炎、增强免疫和保湿美白等功能特性,而广泛应用于药品、保健品、食品添加剂和化妆品等领域。琼胶作为生产海藻寡糖的主要原料之一,极具重要的开发应用价值,然而传统酸水解法降解琼胶制备寡糖,水解过程剧烈,实验参数难以控制,寡糖的生物活性易被破坏。因此,应用生物酶解法生产琼胶寡糖,是发展的必然趋势。海藻是鲍鱼的主要食物,前期研究表明其消化道中存在着多种可降解琼胶的微生物。基于此,本论文从鲍鱼肠道中分离获得高产琼胶酶微生物菌株,并对该菌株进行分子生物学鉴定;系统研究该菌株发酵产琼胶酶性能,优化确定产琼胶酶最佳发酵条件,制备获得高活性琼胶酶;以此琼胶酶为生物催化剂,优化确定琼胶降解工艺参数;通过TLC薄层色谱层析和高效液相色谱分析鉴定琼胶寡糖组成,并研究该琼胶寡糖体外抗氧化能力。主要研究内容及结论如下:(1)从福州市售杂色鲍肠道中成功分离获得18株产琼胶酶菌株,以琼胶作为单一碳源,通过比较各菌株产琼胶酶性能,确定其中一株高产琼胶酶菌株作为本论文研究菌株,对该菌株进行16SrDNA序列分析,经与NCBI及核糖体数据库比对,明确该菌株属于蝙蝠弧菌属(Vampirovibrio sp.),命名为Vampirovibrio sp.fjfst-2013001。(2)采用单因素试验并结合正交试验设计,优化Vampirovibrio sp.fjfst-2013001发酵产琼胶酶条件,确定最佳培养基组成为:琼胶浓度为0.25%(w/v),盐度为2.5%(w/v),酵母粉浓度为0.15%(w/v),胰蛋白胨浓度为0.6%(w/v):最佳发酵条件为:初始pH8.0,接种量8%,培养温度25℃,摇床转速lOOr/min,发酵时间48h。在此条件下,制得琼胶酶粗酶液酶活力为4.17U/ml,比优化之前(1.73U/ml)提高了 241.04%。(3)探究了琼胶酶分离纯化方法和琼胶酶酶学性质的研究,对发酵液盐析法进行浓缩,将浓缩的粗酶液经过DEAE-Sepharose Fast Flow柱进行离子交换层析与和SephcrylS-100进行层析。最后纯化了约29.5倍,回收率为39.53%,之后经过电泳做蛋白纯度鉴定,结果为单一条带,以琼胶酶为生物催化剂,优化确定降解琼胶的酶解工艺条件为:酶解温度45℃,酶解pH8,琼胶浓度0.25%,酶解时间15min。由大分子多糖酶解反应试验显示,该酶对壳聚糖、卡拉胶、黄原胶、海藻酸钠、可溶性淀粉、蔗糖、低聚异麦芽糖等均无水解能力,表明酶具有良好的底物专一性。由金属离子耐受能力试验表明,除铜离子、铝离子、铁离子和表面活性剂SDS对酶有一定破坏能力,该酶对其他金属离子具有一定的耐受性。(4)对琼胶酶解产物采用TLC分析和HPLC检测,结果表明,该粗酶液降解琼胶可获得唯一产物--新琼六糖。对新琼六糖进行了体外抗氧化实验,分别研究其抗羟自由基能力、抗超氧阴离子能力、清除DPPH能力和总抗氧化能力。结果表明,该新琼六糖具有一定的体外抗氧化能力。