葛根解酒液和葛根素对大鼠酒精性肝病治疗作用的研究

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目的:构建大鼠酒精性肝病动物模型,探索酒精性肝病的发病机制;探讨葛根及葛根素对酒精性肝病的治疗作用。材料及方法:健康SD大鼠108只,雌雄各半,体重180-220g。随机分为五组,治疗组药物选用葛根解酒液(自制)和葛根素注射液(山东瑞阳制药有限公司)。A组(模型对照组):36只,生理盐水灌了胃10ml/kg.day,分别于4W、8W、12W各处死12只取材检测相应指标。B组(模型组):36只,56%酒精灌胃10ml/kg.day,分别于4W、8W、12W各处死12只取材检测相应指标。C组(葛根解酒液治疗组):12只,56%酒精灌胃10ml/kg.day,连续12W;从9W开始另加腹腔注射葛根解酒液0.01g/kg.day;于12W全部处死取材检测相应指标。D组(葛根素治疗组):12只,56%酒精灌胃10ml/kg.day,连续12W;从9W开始腹腔注射葛根素0.01g/kg.day;于12W全部处死取材检测相应指标。E组(治疗对照组):12只,56%酒精灌胃10ml/kg.day,连续12W;从9W开始腹腔注射生理盐水0.01ml/kg.day;于12W全部处死取材检测相应指标。检测大鼠血清ALT、AST及铁含量、SOD活力及MDA含量;检测肝组织中SOD活力及MDA含量,并通过RT-PCR检测肝hepcidin的表达;取大鼠肝组织块于4%多聚甲醛固定24小时,常规组织制片(切片为5μm)、HE染色、免疫组化;取部分肝组织进行冰冻切片(切片为20μm)苏丹Ⅳ染色,光镜下观察。结果:(1)一般情况108只大鼠共103只完成实验周期,实验期间模型组2只大鼠因灌胃误呛入肺而导致死亡,有3只因不能长期耐受酒精而死亡,A组大鼠均存活。实验过程中,B组和E组大鼠较A组大鼠精神状态差、毛发光泽差、食欲差、大便溏泻、反应迟钝、而且活动减少,体重增长缓慢(P<0.01),肝指数明显增加(P<0.01);C组和D组在治疗期间(9-12W)大鼠精神状态都比治疗前较好,活动增多,体重增长与E组相比较快(P<0.01)、肝指数减小(P<0.01),但两个治疗组(C组和D组)体重增长都比A组慢(P<0.01);C组和D组体重增长幅度及肝指数无明显差异(P>0.05)。(2)大鼠血清ALT、AST含量B组与A组比较,B组的血清ALT、AST及铁含量明显增高(P<0.01);C组、D组与B组、E组比较,C组和D组的血清ALT、AST及铁含量明显降低(P<0.01)。C组与D组比较,两组的ALT和AST含量无明显差异(P>0.05)。(3)大鼠血清SOD活力及MDA含量B组与A组比较,B组SOD活力明显降低(P<0.01)、MDA含量明显升高(P<0.01);C组、D组与B组比较,C组和D组SOD活力明显增高(P<0.05)、MDA含量明显降低(P<0.01);C组与D组比较,两组的SOD活力及MDA含量无明显差异(P>0.05)。(4)大鼠肝组织SOD活力及MDA含量与A组比较,B组SOD活力明显降低(P<0.01)、MDA含量明显升高(P<0.01);与B组比较,C组和D组SOD活力明显增高(P<0.01)、MDA含量明显降低(P<0.01);C组与D组比较,SOD活力及MDA含量无明显差异(P>0.05)。颗粒沉积;B组:4W处死的大鼠的部分肝组织细胞膜及胞浆内见少量棕黄色颗粒沉积;8W的肝组织细胞膜及胞浆内棕黄色颗粒在颜色和数量上比4W明显;12W的细胞胞浆内棕黄色颗粒在颜色和数量上比8W明显;C组:12W处死的大鼠肝组织细胞膜及胞浆内见少量棕黄色颗粒沉积;D组:12W处死的大鼠肝组织细胞膜及胞浆内见少量棕黄色颗粒沉积;E组:12W处死的大鼠肝组织细胞膜及胞浆内见大量棕黄色颗粒沉积;组间比较:12W处死的大鼠肝组织中TNF-α的阳性表达率,B组高于A组(P<0.01),B组高于C组和D组(P<0.05),C组和D组低于E组(P<0.05),E组高于A组(P<0.01),C组和D组没有显著性差异(P>0.05);12W处死的大鼠肝组织中IL-6的阳性表达率,B组高于A组、C组和D组(P<0.01),C组和D组低于E组(P<0.0,1),E组高于A组(P<0.01),C组和D组没有显著性差异(P>0.05);(8)RT-PCR结果五组大鼠肝组织中β-actin mRNA表达量相同(P>0.05);B组大鼠肝组织Hepcidin mRNA的表达比A组下降(P<0.01),而C组和D组大鼠肝组织Hepcidin mRNA的表达比B组和E组增加(P<0.01);C组和D组大鼠肝组织Hepcidin mRNA的表达无显著差异(P>0.05)结论:(1)采用灌胃法能成功制备大鼠酒精性肝损伤模型;(2)酒精性肝损伤大鼠肝组织TNF-α、IL-6表达增加,Hepcidin表达下降可能在酒精性肝病发生、发展过程中起着重要作用;(3)葛根解酒液和葛根素射液对酒精性肝损伤大鼠有一定治疗作用,二者的治疗效果无显著差异。
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