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本研究以滤过泡瘢痕成纤维细胞为研究对象,从分子水平研究在体外条件下抗转化生长因子-β2抗体对成纤维细胞生长增殖、凋亡及胶原合成的影响并初步探讨其可能的作用机制。
本文选取失败滤过泡的瘢痕组织手术切除的新鲜标本,应用单层成纤维细胞原代及传代培养技术培养获得FB;将不同剂量的转化生长因子-β2抗体加入培养液中与FB共培养,运用MTT法、流式细胞术分别检测抗转化生长因子-β2抗体在不同浓度和不同时相等条件下对FB的增殖抑制、周期阻滞以及凋亡的影响;运用Hoechst33258/PI荧光双染色法并进一步从形态学上观察抗转化生长因子-β2抗体对FB凋亡的影响;同时运用免疫组化法和RT-PCR法分别从蛋白和mRNA水平分析cyclinD1、p21、CPP32、前胶原蛋白Ⅰ和前胶原蛋白Ⅲ等基因的表达改变;另外应用生化显色法测定抗转化生长因子-β2抗体对FB羟脯氨酸合成的影响。