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肥胖被世界卫生组织确认为一种流行病,已严重地影响着人们的身体健康。肥胖症的发生是机体能量代谢失调的结果,近几年来的研究表明,肥胖的发生与遗传基因、环境因素、膳食结构等多种因素有关,是以体内脂肪积聚过多为主要特征的一种全球广泛流行的独立性慢性疾病。因此,研究肥胖症及其相关机制和防治措施已成为21世纪的迫切任务。近年来通过抗氧化降血脂的研究越来越多,因为大量资料表明,肥胖诱导的代谢紊乱与细胞的氧化还原体系有着重要的联系。临床及实验研究证实中药有很好的降脂及减肥作用,国内外学者已经对中药天麻进行了大量的研究,而且最近有研究报道天麻素有抗自由基和保护细胞膜作用,但将其作为干预物质用于抑制高脂饮食大鼠体重增加的实验,尚未见报道。因此本实验用天麻的有效单体天麻素作为干预物质观察其对高脂饮食大鼠体重及生化指标的影响,为研制出疗效好、副作用小的有效减肥中药提供一定的理论依据。
本实验以高脂饮食的SD大鼠,模拟人体的肥胖状态。通过服用不同浓度的天麻素(gastrodin,GAS),观察其对大鼠体重、摄入热量、糖、脂代谢、胰岛素、抗脂质过氧化以及血清瘦素(Leptin)、抵抗素(Resistin)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)等作用的影响,并提取下丘脑总RNA,进行实时荧光定量RT-PCR测定下丘脑NPY和AGRPmRNA的表达水平,并初步分析其可能的作用机制。
实验选用断乳10天雄性健康SD大鼠,体重99.57±2.13g。基础饲料适应喂养1周后,随机分为5组,正常对照组(normal control group,NC)10只,高脂组(high-fat-fed control group,HFC)10只,高脂+天麻素低(gastrodin low-dose group,GAS-L)、中(gaslrodin middle-dose group,GAS-M)、高(gastrodin high-dose group,GAS-H)剂量组(浓度分别为15、30、60mg/kg·d)各8只。除正常对照组喂基础饲料外,其它各组均喂高脂饲料。正常对照组和高脂组每天灌胃0.9%生理盐水0.3ml,高脂+天麻素组灌胃同等容量但不同剂量的天麻素溶液。动物分笼饲养,温度(22±2)℃,湿度为40%~60%,光线为12h明暗循环。各组动物每天上午定时记录进食量与饮水量。每7天测一次体重,连续测8周。实验的第8周末,正常对照组、高脂组和高脂+天麻素低剂量组大鼠空腹12h后(不禁水),股动脉取血测血糖值,分离血清后,用一次提取比色法测定血清游离脂肪酸(FFA)、丙二醛(MDA)和总抗氧化能力(T-AOC)水平,用酶联免疫法(ELISA)测定血清瘦素、抵抗素、TNF-α、IL-6的水平。测定血脂(blood lipid)、胰岛素(Insulin,Ins)、谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)。计算胰岛素敏感指数(IAI)和抵抗指数(IRI).IAI=1/(空腹胰岛素含量×空腹含量),IRI=(空腹胰岛素含量×空腹血糖含量)/22.5。并提取下丘脑总RNA,进行实时荧光定量RT-PCR测定下丘脑NPY和AGRPmRNA的表达水平。实验数据以均数±标准差((x)±s)表示,采用统计软件包SPSS11.5进行单因素方差分析或t检验。
实验结果如下:
1.高脂组大鼠与正常对照组大鼠比较,体重增加(P<0.05~0.001);摄入热量增多(P<0.01~0.001.);摄水量减少(P<0.05~0.001);下丘脑NPY、AGRPmRNA表达增高(P<0.001);血糖浓度升高,胰岛素敏感指数下降,抵抗指数上升(P<0.05~0.01);血清瘦素、抵抗素、IL-6水平增高(P<0.05~0.01.);FFA、LDL增高,HDL降低(P<0.05~0.01);T-AOC明显下降,MDA却明显上升,同时GFT明显增加(P<0.05~0.001)。
2.天麻素组大鼠与高脂组大鼠比较,各天麻素组体重降低(P<0.05~0.01),但低、中、高剂量组之问无差异(P>0.05)。天麻素低、中、高各组的摄入热量从第4周后开始明显下降(P<0.05~0.001),但各组的摄水量差异不显著,无统计学意义(P>0.05)。下丘脑NPY、AGRPmRNA表达下降(P<0.001),血糖浓度降低,胰岛素敏感指数升高而胰岛素抵抗指数降低(P<0.05~0.01)。瘦素、抵抗素、TNF-α、IL-6水平均下降(P<0.05),FFA明显降低(P<0.001),LDL、HDL无明显改变(P>0.05)。T-AOC明显上升,MDA含量下降(P<0.01~0.001)。
本实验研究表明天麻素(GAS)能明显抑制高脂饮食大鼠体重的增加,作用机理可能与抑制大鼠下丘脑增食因子NPY和AGRPmRNA的表达,改善瘦素抵抗,提高胰岛素敏感性,降低血清中抵抗素和炎症因子的水平,调节FFA和糖代谢有关。