甘草黄酮提高蝉拟青霉胞内皂苷机理及功效的研究

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蝉花是一种具有营养和药用价值的食药两用真菌。其主要活性产物皂苷有抗肿瘤,抗癌,降血糖以及免疫调节等功效。但是,天然蝉花子实体生长受外界环境影响栽培困难,生长周期长,产量不稳定。蝉拟青霉液态发酵菌丝体可以克服这些缺点,同时具有类似天然蝉花的功效,可以成为天然蝉花的替代品。本文初步探究了甘草黄酮提高蝉拟青霉胞内皂苷(IPS)含量的工艺条件与机制,研究了甘草黄酮对蝉拟青霉皂苷体外抗氧化以及抑制两种淀粉水解酶作用的影响,得到了以下结果:(1)比较多种含有黄酮类化合物的植物后,推断出甘草促进蝉拟青霉IPS合成最显著,进一步确证甘草黄酮(FG)极其显著的增加IPS的合成;FG促进IPS合成的最佳培养基成分为木糖2%,果糖6%,甘油4.47%,玉米蛋白0.9%,麸皮5%,大黄米5%,CuSO4 0.06%,甘草黄酮0.18%,最适条件为摇床转速180rpm,培养温度24℃,培养时间120 h,接种量17%,装液量120 mL;利用最适培养基成分,在最适培养条件下,蝉拟青霉液态发酵,IPS产量达到4.589±0.323g/100mL。(2)薄层色谱显示未添加甘草黄酮的蝉拟青霉胞内皂苷(PS)只有3个组分,而添加甘草黄酮的胞内皂苷(LPS)有七个组分。体外抗氧化实验结果显示,LPS相较于PS的清除DPPH自由基、抑制羟基自由基、铁还原抗氧化活性得到了提高,分别提高了9.6%,10.08%和25.98%。动力学模型分析表明,LPS通过同时增加与底物的亲和力以及清除DPPH自由基和铁还原抗氧化性的最大反应速率来实现抗氧化性的提高;IPS抑制羟基自由基生成反应是混合型抑制,且以竞争型抑制为主。体外抑制淀粉水解酶活性实验结果显示,LPS抑制α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性增强了;动力学模型研究显示,LPS通过增加对α-葡萄糖甘酶和α-淀粉酶的亲和力,以及对两种酶与底物复合物的亲和力来实现抑制两种酶活性的提高。同时IPS抑制α-葡萄糖甘酶和α-淀粉酶反应是混合型抑制,且以竞争型抑制为主。(3)采用转录组学方法研究添加和未添加甘草黄酮的蝉拟青霉菌丝体基因的表达差异。对差异基因进行GO分析发现:添加甘草黄酮主要影响:与代谢过程,单一生物过程和细胞过程相关基因的表达;调控与催化活性,结合有关的基因;影响与细胞,细胞部分相关基因的表达。对差异基因进行KEGG代谢通路分析发现:差异基因主要参与了global and overview maps,氨基酸,碳水化合物相关的代谢途径;参与翻译相关的代谢途径。发现己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸异构酶、果糖二磷酸醛缩酶、丙酮酸脱氢酶、L-乳酸脱氢酶、柠檬酸合成酶、琥珀酸脱氢酶、8-amino-7-oxononanoate aminotransferase、dethiobiotin synthetase、羟甲基戊二酰-辅酶A合成酶、羊毛甾醇14α-脱甲基化酶、甲基固醇单加氧酶和Δ7-甾醇5-去饱和酶等基因上调。
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