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高效及小型化生物过滤技术是建立循环水水产养殖系统的关键技术。生物过滤器完整硝化功能的建立是生物过滤器发挥处理效能的前提和关键。20℃左右,淡水生物过滤器接种挂膜需要8~20d建立硝化功能,而盐度35的海水生物过滤器需要60~75d。如何快速构建海水生物过滤器的硝化功能成为研究的热点。
本研究采用盐度梯度驯化法将已建立完全硝化功能的淡水生物过滤器驯化为具完全硝化功能的海水生物过滤器。结果表明盐度梯度驯化法比直接构建海水生物过滤器硝化功能节约时间。25℃,对照组盐度25海水直接构建硝化功能耗时70d;采用两步驯化法(将成熟硝化型淡水生物过滤器驯化为盐度10,硝化功能恢复后再驯化为盐度25)需56d;采用一步驯化法(将成熟硝化型淡水生物过滤器直接驯化为盐度25)需61d。
盐度梯度驯化法可以快速构建海水生物过滤器的氨氧化功能。对照组盐度25海水直接构建过滤器硝化功能,过滤器氨氧化功能成熟需55d;采用两步驯化法需21d,比对照组缩短61.8%;一步驯化法需48d,比对照组缩短12.7%。驯化过程中采用较为温和的两步驯化法比一步驯化法更加安全有效。
25℃,成熟的盐度25海水生物过滤器的氨氮日均降解率(57.71g·m-3·d-1~98.63 g·m-3·d-1)与成熟的淡水生物过滤器的氨氮日均降解率(68.57 g·m-3·d-1~90.96 g·m-3·d-1)相似。
本研究通过PCR.DGGE技术分析生物膜细菌群落结构,结果显示淡水生物过滤器生物膜细菌群落结构相似,与海水生物过滤器生物膜细菌群落结构差异明显。淡水系统生物膜的优势菌群为p.变形菌纲(Beta proteobacteria)菌群,在硝化作用过程中起着重要的作用,其中的亚硝化单胞菌(Nitrosomonas sp.),是氨氧化的功能菌。此外还有硝化螺菌(Nitrospira sp.),是亚硝酸盐氧化的功能菌。海水生物过滤器生物膜菌群包括γ-变形菌纲(Gamma proteobacteria),寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)细菌;α-变形菌纲(Alpha proteobacteria)细菌;厚壁菌门(Firmicutes),芽孢杆菌纲(Bacilli),类芽孢杆菌属(Paenibacillus)细菌等。尽管过滤器只进行无机氨氮配水,两种过滤器仍存在大量的异养菌,其有机碳源来源可能为胞外分泌产物、细胞裂解产物和为弥补水分蒸发而添加的陈化自来水中所含有机碳。
运用荧光素.荧光素酶法检测盐度冲击前后的生物膜微生物ATP含量变化,结果表明投加海盐至盐度15和投加海盐至盐度25一天后,生物膜微生物ATP,总量分别下降了17.4%和47.7%,生物过滤器氨氮日均降解率分别下降了38.7%和56.2%,亚硝酸盐氧化功能几乎被完全抑制,而后硝化功能逐步恢复。海水对生物膜微生物的胁迫强度,亚硝酸盐氧化菌群>氨氧化菌群>微生物整个群落,且胁迫作用随盐度的增高而增高。
成熟的淡水系统生物膜微生物ATP含量在1×10-12~2×lO-12 mol/g滤料之间,根据ATP含量推算活性细菌数目在105~106个/g滤料之间。生物膜活性的变化趋势佐证了驯化过程中采用将成熟淡水生物过滤器首先驯化到一个相当于目标盐度一半的过渡盐度,然后再提高盐度到目标盐度的两步驯化法比直接驯化到目标盐度的一步驯化法更加安全有效。本研究表明,盐度梯度驯化法是快速构建海水生物过滤器硝化功能的有效方法之一,为新建海水循环水养殖系统缩短生物过滤器硝化功能构建时间,降低养殖成本提供了一条切实可行的途径,具有较大的应用前景和经济价值。通过PCR-DGGE技术和荧光素.荧光素酶法测定ATP技术对生物膜微生物相的种群和活性受盐度影响变化的研究,为盐度驯化法构建海水生物过滤器硝化功能的条件优化提供了理论依据。