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第一部分无脑畸形胎儿脑组织microRNAs的差异表达背景神经管畸形(neural tube defects, NTDs)是人类最常见的一种出生缺陷,其中无脑畸形是最常见的类型之一。NTDs的病因非常复杂,目前认为主要是遗传和环境的相互作用造成。microRNAs是一种参与基因转录后水平调控的非编码RNAs,在多种生命活动如胚胎神经发育中均可发挥重要作用,随着人们对microRNAs的逐渐认识,推测其和相应的靶基因有可能在NTDs的发生中起作用。目的探讨无脑畸形胎儿残存脑组织和正常引产胎儿脑组织中microRNAs的差异表达谱,并运用生物信息学手段预测这些miRNAs的靶基因。方法利用Affymetrix公司推出的GeneChip miRNA表达谱芯片分析无脑畸形胎儿残存脑组织和正常引产胎儿脑组织中miRNAs的差异表达。采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)对差异表达显著的10个miRNAs进行进一步验证。运用数据库预测上述经过验证的miRNAs的靶基因。结果1miRNA芯片初筛结果：与正常对照组相比,无脑儿组有87个miRNAs表达差异显著(两组差异>2倍)。其中表达上调的miRNAs有73个,表达下调的有14个。2.根据表达差异显著性程度和在脑组织中表达的特异性,选取上述有显著表达差异的miRNAs中的10个miRNAs行real-time PCR进行验证。发现mir-103、mir-132、mir-138、mir-185、mir-23a、mir-134、mir-22、mir-34a和mir-149的检测结果与miRNA芯片初筛结果一致,其中表达上调的有mir-103、mir-132、mir-138、mir-185、mir-23a、mir-134、mir-22和mir-34a；表达下调的为mir-149。mir-125a的结果与芯片结果相反。结论经过miRNA芯片初筛和进一步的real-time PCR验证,一定数目的miRNAs可能通过调控多个途径中的靶基因从而参与无脑畸形的发生。第二部分miR-34a对人脑胶质母细胞瘤中Notch信号通路的影响背景既往研究发现一些miRNAs对叶酸代谢和NTDs的发生可能有一定的影响,尤其是miR-34a。根据前期数据库预测Notch1和D111基因可能是受miR-34a调控的靶基因。同时有研究结果显示Notch信号通路在胚胎神经形成过程中可能起着重要的调节作用,故推测miRNA可能通过调控如Notch等重要的信号通路影响神经形成过程。目的根据前期芯片的筛选结果,探讨miR-34a对人脑胶质母细胞瘤Notch信号通路的影响。方法利用miR-34a mimics脂质体瞬时转染人脑胶质母细胞瘤细胞株U87,转染24h后用real-time RT-PCR和Western blot技术检测Notch信号途径中Notch1和Dill基因mRNA和蛋白表达水平,同时检测转染后胞内miR-34a的mRNA水平。结果经转染miR-34a mimics的U87细胞内has-miR-34a表达明显升高,而Notch1和D111基因的mRNA水平没有明显变化,蛋白表达水平则有明显降低。结论miR-34a mimics可通过上调胞内miR-34a的水平,从而抑制其预测靶基因Notch1和Dlll的蛋白而非mRNA的表达,提示它是在转录后的翻译水平发挥对靶基因的调控作用。miR-34a可能通过下调Notch信号途径而导致NTDs的发生。