论文部分内容阅读
沙眼衣原体(Chiamydia trachomatis,Ct)是常见性病病原体之一,是一类活细胞内寄生原核生物。入侵宿主后释放最重要的蛋白因子:衣原体蛋白酶样激活因子(Chlamydial Protease-Like Activity Factor,CPAF),致病中发挥重要作用。干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes,STING)和髓样分化因子88(myeloiddifferentiationfactor88,MyD88)都是胞内天然免疫反应信号通路中的重要接头蛋白。两者借助共同下游信号通路与衣原体感染相关,可能在其致病过程中发挥重要作用。鼠衣原体(Chiamydia muridarum,mouse pneumonitis agent,MoPn)基因结构和组成与人型Ct极为相似。因此,用MoPn建模研究Ct致病机制。目的:本研究体外验证CPAF可能协助MoPn逃避胞外免疫监视,进而选STING-/-、MyD88-/-和C57BL/6J小鼠为对象,分别通过不同的MoPn感染途径构建动物模型,检测生殖道不同组织段的MoPn播散量、阴道清除速度、病理变化,分析STING、MyD88在生殖道功能屏障中的作用,研究衣原体可能的致病机制。方法:(1)用T细胞、DC及OT1或OT2抗原模拟抗原递呈过程,与不同浓度CPAF作用,ELISA分别检测上清液中IL-2的量。电泳分离及卡马斯亮蓝法,分析CPAF处理及未处理衣原体抗原组电泳条带变化。分别选一种能被CPAF酶切及未能酶切的衣原体抗原代替OT2及OT1,重复抗原递呈过程。ELISA分别检测上清液IL-2的量。(2)用2X105IFUs MoPn经不同途径(阴道、宫腔、子宫远端段及卵巢囊)感染野生型、STING-/-、MyD88-/-小鼠。不同时间点处死小鼠,一部分生殖道大体评分、H&E染色、组织和细胞免疫荧光技术(immunofluorescence,IF),对比组织病变程度。(3)一部分小鼠生殖道分段匀浆,IF检测子宫-输卵管屏障(uterotubal junction,U-T屏障)及宫颈屏障两侧衣原体量的差别。结果:1.CPAF选择性抑制MHCⅡ-OT2抗原递呈过程而非MHCⅠ-OT1(***P<0.001)。CPAF同样具有选择性酶切衣原体T细胞抗原(***p<0.001)。2.经宫颈感染,STING-/-小鼠上生殖道大体病变和显微镜下炎症评分比野生型更严重(**p<0.01)。提示,STING可能参与U-T屏障功能。3.经宫颈感染,MyD88-/-小鼠带菌时间明显延长(**P<0.01)。经宫颈及阴道感染均显示,MyD88-/-小鼠上生殖道组织大体和微观病变更严重(**P<0.01)。提示,宫颈屏障及U-T屏障功能都可能因MyD88缺失而受影响。4.经卵巢囊及子宫远端段感染,C57BL/6J小鼠U-T屏障两侧衣原体量有显著差异(*p<0.05),STING-/-及MyD88-/-差异不显著(p>0.05)。提示两者参与U-T结构屏障功能。结论:1)CPAF选择性酶切Ct抗原,协助Ct逃避宿主胞外免疫监视。2)STING信号通路主要通过参与U-T屏障功能,控制衣原体上行感染输卵管。3)MyD88信号通路同时参与U-T屏障和宫颈屏障功能,抑制衣原体播散,控制衣原体上行感染输卵管。