对绒山羊羔羊卵巢进行超数排卵处理后能够获得大量的卵母细胞,可以广泛应用于胚胎工程的各种技术当中,以缓解胚胎工程各项技术卵源匮乏的问题。但是,羔羊卵母细胞存在的成熟率低和发育潜能低等质量问题却长期以来限制羔羊卵母细胞的利用效率。为探究这一问题,我们对羔羊卵母细胞进行研究,寻找羔羊卵母细胞与成年羊卵母细胞之间发育潜能的差异。在本研究中,通过超数排卵获得大量羔羊卵母细胞,体外成熟培养后用于体外受精和体细胞核移植技术,分析羔羊卵母细胞与成年羊卵母细胞在成熟、发育能力上的差异;并运用转录组测序分析技术,对4周、6周、8周和10周周龄的羔羊卵巢基因表达量进行分析,寻找和成年羊卵巢基因表达之间的差异。研究结果如下:(1)运用体外受精技术对羔羊卵母细胞与成年羊卵母细胞的发育潜能进行探究,羔羊卵母细胞与成年羊卵母细胞的成熟率分别为42.54%±3.27%和81.14%±2.35%。体外受精后,精子穿卵率分别为62.79%±3.01%和78.03%±2.52%,卵裂率分别为55.81%±2.08%和74.89%±1.81%。结果显示,羔羊卵母细胞与成年羊卵母细胞相比,成熟率、卵裂率和发育潜能较低,且差异显著(p<0.05)。(2)运用体细胞核移植技术进一步对羔羊卵母细胞与成年羊卵母细胞的发育潜能进行探究。通过BCB染色对羔羊卵母细胞进行分选。对羔羊卵母细胞BCB染色阳性组、阴性组及成年羊卵母细胞进行核移植操作,融合率分别为16.07%±2.33%、20.59%±1.73%和53.05%±1.64%,胚胎卵裂率分别为72.23%±3.02%、80.95%±2.79%和85.06%±2.76%。结果表明,羔羊卵母细胞发育潜能低于成年羊卵母细胞的发育潜能,且差异显著(p<0.05)。(3)为从分子水平深入探究造成羔羊卵母细胞发育潜能较低的原因,选用4周、6周、8周和10周周龄羔羊卵巢组织及成年羊卵巢组织进行转录组测序。本次转录组测序共测出基因21871个,其中4周、6周、8周和10周周龄羔羊卵巢与成年羊卵巢的差异基因分别为4393个、1617个、2126个和2601个,所占比例依次为20.08%、7.39%、9.72%和11.89%。(4)对转录组测序结果进行分析,细胞周期相关基因C-MOS和BMP15在羔羊卵巢组织中表达量高于成年羊卵巢组织,RPS6KA2表达量低于成年羊卵巢组织,且差异显著(p<0.05)。WNT基因家族的WNT2、WNT3、WNT4、WNT7A和WNT16在羔羊卵巢和成年羊卵巢中的表达量存在差异。WNT3和WNT7A在不同周龄羔羊卵巢中均呈现上调趋势,WNT2、WNT4和WNT16呈现下调趋势,且差异显著(p<0.05)。WNT基因家族翻译的蛋白质所激活的通路为WNT通路,这一通路可以调控细胞的生长周期,同时也可以调节细胞间的粘附作用。我们推测上述基因表达差异与羔羊卵母细胞发育能力低于成年羊卵母细胞发育能力有关。