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创伤后应激障碍(posttraumatic stress disorder,PTSD)是指通常在个体遭遇严重创伤性事件后延迟出现并持续存在的一类精神疾病。PTSD损害人际关系和社会功能,并与抑郁症、物质滥用等共病,严重影响患者的生存质量。然而,世界范围内对于PTSD的神经生物学机制尚未完全了解,目前主流的心理治疗和药物治疗方法的疗效很有限。因此研究PTSD的发病机制以及寻找新的预防或干预靶点具有重要意义。创伤相关线索的暴露引发PTSD患者恐惧记忆的闪回,进而产生回避行为、过度警觉以及负性认知和情绪是PTSD的重要特征,说明恐惧记忆与PTSD的发生、发展以及预后等密切相关。恐惧记忆机制的研究可能为PTSD的预防和治疗带来新的机会。研究表明,记忆形成是一个动态变化的过程,通常包括记忆的建立、巩固、再激活、再巩固、消退等几个过程。将条件刺激(情景)与引起恐惧的非条件感觉刺激(电击)通过配对训练建立联系,从而产生恐惧记忆,是研究PTSD相关恐惧记忆的重要实验范式。然而,最新获得的恐惧记忆是脆弱的、易受干扰的,需要经过巩固的过程变成稳定的长期记忆(long-term memory,LTM),并随着时间的流逝被转化成为对恐惧的条件反应。当个体再次暴露在记忆相关的条件线索下,恐惧记忆会被再次激活,重新回到脆弱易变的状态,需要经过另一个类似巩固的过程使之重新稳定下来,即记忆再巩固。记忆的巩固和再巩固过程都依赖于情景,而海马是情景相关信息加工的关键脑区。以往的研究表明,海马依赖性的记忆受到类固醇激素如性激素或糖皮质激素的影响。然而,类固醇激素在调节记忆过程中的作用机理尚不清楚。类固醇受体辅活化因子-1(steroid receptor coactivator-1,SRC-1)是P160辅活化因子家族中的重要成员,辅助多种类固醇激素受体如雄激素、雌激素、甲状腺激素受体,以配体依赖性的方式促进基因的转录。已有研究报道海马中SRC-1与突触可塑性相关蛋白的表达相关,如Glu R1、PSD95和突触素蛋白。我们最近的研究发现,定向RNA干扰抑制海马SRC-1表达后,小鼠的空间记忆水平下降,海马突触密度降低,CA1区LTP幅度显著降低,提示SRC-1通过调节海马突触可塑性来影响基于海马的学习记忆行为。然而,海马SRC-1在恐惧记忆巩固与再巩固中的作用尚待阐明。本研究采用了免疫印迹(Western blot,WB)、免疫荧光、高架十字迷宫、旷场实验等检测方法。首先建立情景性条件恐惧的动物模型,检测了情景性恐惧记忆建立和再激活对小鼠海马SRC-1表达的影响;然后构建了抑制SRC-1的腺相关病毒(adeno-associative virus,AAV),检测其转染至海马CA1区后的表达情况及对SRC-1的干扰效果;再利用高架十字迷宫、旷场实验观察病毒注射及抑制海马SRC-1对小鼠焦虑样行为和运动能力的影响;接着检测抑制海马中SRC-1表达对小鼠恐惧记忆巩固的影响;随后检测抑制海马中SRC-1表达对小鼠恐惧记忆再巩固的影响;初步探讨了海马SRC-1影响情景恐惧记忆巩固和再巩固过程可能的机制。主要结果:1.情景性恐惧记忆建立后,SRC-1的表达呈时间依赖性增加,在90min时达到峰值;情景性恐惧记忆建立过程中SRC-1表达增加与条件刺激(情景)及非条件刺激(足部电击)的配对学习有关,而单纯条件刺激或单纯非条件刺激诱发海马SRC-1的表达与对照组无明显差异。情景性恐惧记忆激活后,SRC-1的表达呈时间依赖性增加,在30min时达到峰值。2.SRC-1干扰腺相关病毒能够在海马CA1区细胞内成功转染并表达;此外,WB结果显示,与对照病毒相比,SRC-1干扰腺相关病毒能够显著抑制海马SRC-1的表达;3.向小鼠海马中注射SRC-1干扰腺相关病毒(shSRC-1)及对照病毒(GFP control),高架十字迷宫中两组小鼠在总活动路程、开臂停留时间及开臂进入次数上均没有显著差异;旷场实验中,注射SRC-1干扰病毒的小鼠在总活动路程、中央区域停留时间以及中央区域活动路程上均没有显著差异。4.抑制海马SRC-1的表达,恐惧记忆建立后24h小鼠僵立反应时间显著降低,提示恐惧记忆的巩固被破坏;情景性恐惧记忆建立显著上调海马中突触可塑性相关蛋白GluR1和PSD-95的表达,而抑制SRC-1表达后建立条件恐惧记忆,GluR1和PSD-95表达与对照组无明显差异。5.抑制海马SRC-1的表达,激活恐惧记忆24h后,小鼠僵立反应时间显著降低;情景性恐惧记忆激活导致突触可塑性相关蛋白PSD-95和GluR1表达增加,而抑制海马SRC-1的表达后激活恐惧记忆,GluR1和PSD-95的表达与对照组无明显差异。主要结论:1.情景性恐惧记忆建立后海马SRC-1的表达增加,抑制海马SRC-1表达会破坏恐惧记忆的巩固;提示SRC-1对情景性恐惧记忆的巩固有调节作用。2.情景性恐惧记忆的再激活后海马SRC-1的表达增加,抑制海马SRC-1表达会破坏恐惧记忆的再巩固;提示SRC-1对情景性恐惧记忆的再巩固有调节作用。3.情景性恐惧记忆建立和激活导致突触可塑性相关蛋白PSD-95和GluR1表达增加,而海马中注射SRC-1干扰病毒抑制了突触蛋白的表达;提示突触蛋白表达的改变可能是SRC-1影响恐惧记忆巩固与再巩固的基础。