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目的:明确骨肉瘤细胞缺氧条件下HIF-1α调控乳酸脱氢酶-A的分子机制及乳酸脱氢酶-A对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的影响。方法:1.免疫组化分析18例临床标本,确认乳酸脱氢酶-A在骨肉瘤患者中的表达情况;2.实时荧光定量PCR检测分析骨肉瘤细胞系MG63细胞在常氧条与缺氧条件下乳酸脱氢酶-A的表达情况。蛋白印记法检测骨肉瘤细胞系MG3细胞在常氧条与缺氧条件下乳酸脱氢酶-A及HIF-1蛋白水平的表达情况。3.构建含有乳酸脱氢酶-A启动子区的萤光素酶报告载体,通过免疫荧光素酶活性实验检测MC63细胞缺氧诱导表达的内源性HIF-1是否对乳酸脱氢酶-A具有调控作用,并进一步明确HIF-1对乳酸脱氢酶-A的调控位点;常氧下转染HIF-1过表达质粒,观察外源性HIF-1的表达对乳酸脱氢酶-A的调控作用及位点。4.构建HIF-1敲除质粒并转染MG63细胞,对比常氧条件与缺氧条件下,敲除HIF-1后是否能有效抑制乳酸脱氢酶-A的表达,从而进一步反正HIF-1对乳酸脱氢酶-A的调控。5.构建乳酸脱氢酶-A敲除质粒,缺氧条件下培养MG63细胞,通过细胞划痕实验,观察敲除乳酸脱氢酶-A对MG63细胞的迁移能力的影响。6.通过细胞活性检测实验,检测缺氧条件下敲除乳酸脱氢酶-A后,MG63细胞的细胞活力及增殖情况。结果:1.乳酸脱氢酶-A在大多数骨肉临床样本中高表达,在检测的18例临床样本中,4例弱阳性、8呈阳性、6例呈强阳性,阳性率达80%;2.缺氧条件下,RT-PCR检测MG63细胞中乳酸脱氢酶-A表达明显上调,与常氧条件相比较差异具有统计学意义(p<0.05);3.通过荧光素酶报告实验,我们发现缺氧条件下HIF-1可诱导乳酸脱氢酶-A的表达,其调控关系主要通过结合乳酸脱氢酶-A启动子区的缺氧诱导元件-D介导。4.通过RNA干扰技术,缺氧条件下敲除HIF-1α后,明显的抑制了缺氧对乳酸脱氢酶-A表达的诱导;5.通过划痕实验,我们发现缺氧条件下MG63细胞敲除乳酸脱氢酶-A后,能明显抑制其迁移能力;6.通过细胞活性实验检测,缺氧条件下MG63细胞敲除乳酸脱氢酶-A后,其增殖能力受到一定程度的抑制,与未敲除组比较不具统计学意义。结论:本研究发现骨肉瘤组织中,肿瘤内部常处于缺氧状态,缺氧的微环境下HIF-1表达上调,并通过与乳酸脱氢酶A启动子区的缺氧诱导原件-D结合激活其表达。同时,我们还发现乳酸脱氢酶A可以促进骨肉细胞的迁移,但对肉瘤细胞的增殖活性未见明显影响。