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目的:通过体外研究模拟餐后甘油三酯异常以及伴有的血糖异常对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)的损伤作用,探讨餐后状态下甘油三酯、甘油三酯波动、高血糖并存对血管内皮的损伤作用。 方法: 1、以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为研究对象,体外培养至第六代并应用不含血清的1640完全培养基饥饿24小时已达到同步化后用于试验。 2、从医院收集人的正常血清及高甘油三酯血清(HTGBS)并配比为所需浓度,并进行除菌、灭活处理。其他指标配比为相近浓度。血清中的甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、葡萄糖(GLU)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)等指标均由医院检验科全自动生化分析仪检测。分装并储存在-80℃冰箱中。 3、实验共10组,给予以下条件,共作用3天。1组:葡萄糖浓度5.5mmol/L+TG1.56 mmol/L。2组:葡萄糖浓度5.5 mmol/L+TG3.45mmol/L,3组:葡萄糖浓度5.6 mmol/L+TG5.52 mmol/L,4组:葡萄糖浓度5.5 mmol/L+TG1.56 mmol/L(8小时)与3.45 mmol/L(16小时)交替,5组:葡萄糖浓度5.5 mmol/L+TG1.56 mmol/L(8小时)与5.52mmol/L(16小时)交替,6组:葡萄糖浓度25 mmol/L+TG1.56 mmol/L,7组:葡萄糖浓度25 mmol/L+TG3.45 mmol/L,8组:葡萄糖浓度25mmol/L+TG5.52 mmol/L,9组:葡萄糖浓度25 mmol/L+TG1.56 mmol/L(8小时)与3.45 mmol/L(16小时)交替,10组:葡萄糖浓度25 mmol/L+TG1.56 mmol/L(8小时)与5.52 mmol/L(16小时)交替。结束后换用葡萄糖浓度5.5 mmol/L+TG1.56 mmol/L培养8小时,测定各组细胞活力(MTT)指标,收取上清液测单核细胞趋化蛋白(monocytechemoattractant protein-1,MCP-1)、血管内皮细胞间粘附分子vascular cell adhesion molecule,VCAM-1)、细胞间粘附分子(interscular celladhesionmolecule,ICAM)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、丙二醛malondiadehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide sismutase,SOD)、一氧化氮(nitric oxide,NO)。 4、统计学分析:符合正态分布计量资料以(x)±s表示,采用SPSS13.0软件进行统计学分析,多组间数据比较用单因素方差分析,两两比较用LSD检验,P<0.05为差异有统计学意义。 结果: 1、MTT:中浓度甘油三酯波动组大于高浓度波动组的OD值(P<0.05)。相同葡萄糖浓度情况下,与低浓度甘油三酯组比较,持续中浓度甘油三酯组OD值升高,而持续高浓度甘油三酯组OD值降低。在相同的甘油三酯作用下,高糖组要比低糖组的OD值低,单纯高糖组的OD值大于单纯高浓度甘油三酯组而小于单纯中浓度高甘油三酯组,而高浓度葡萄糖与高浓度甘油三酯联合培养组含量最低。同等程度的甘油三酯波动,高糖组的OD值要低于低糖组。 2、上清液CRP水平:相同葡萄糖浓度下,持续高甘油三酯及波动性高甘油三脂组测得CRP均数均高于低甘油三酯组。在低葡萄糖浓度组,与低浓度甘油三酯组相比,其他各组CRP均升高,甘油三酯波动组较等水平的高甘油三脂组低,但无明显差别。在联合高浓度葡萄糖组中,与低浓度甘油三脂组相比,其他各组CRP升高,但波动性甘油三酯组较其无明显差异。在同等甘油三酯水平下,高糖组CRP较低糖组高。单纯高糖组CRP较单纯高浓度甘油三酯组的CRP低,而高浓度葡萄糖与高浓度甘油三酯联合培养组含量最高。同等程度的甘油三酯波动,高糖组的CRP含量要大于低糖组。 3、上清液ICAM含量:相同葡萄糖浓度下,持续高甘油三酯及波动性高甘油三脂组测得ICAM均数均高于低甘油三酯组。在低葡萄糖浓度组,波动性中浓度甘油三酯组与低浓度甘油三酯组相比无明显差异,其他各组ICAM与其相比均明显升高。在联合高浓度葡萄糖组中,与低浓度甘油三脂组相比,持续高甘油三脂组ICAM均数升高,但波动性甘油三酯组较其无明显差异。在同等甘油三酯水平下,高糖组ICAM较低糖组高。单纯高糖组ICAM较单纯高浓度甘油三酯组的ICAM低,而高浓度葡萄糖与高浓度甘油三酯联合培养组含量最高。同等程度的甘油三酯波动,高糖组的ICAM含量要大于低糖组。 4、上清液VCAM含量:相同葡萄糖浓度下,持续高甘油三酯及波动性高甘油三脂组测得VCAM均数均高于低甘油三酯组。在低葡萄糖浓度组,波动性高浓度甘油三酯组和持续高浓度甘油三酯组与低浓度甘油三酯组相比明显升高,其他各组VCAM与其相比无明显差异。在联合高浓度葡萄糖组中,与低浓度甘油三脂组相比,波动性中浓度甘油三酯组较其无明显差异,而其他组较其明显升高。在同等甘油三酯水平下,高糖组CVAM较低糖组高。单纯高糖组VCAM较单纯高浓度甘油三酯组的VCAM低,而高浓度葡萄糖与高浓度甘油三酯联合培养组含量最高。同等程度的甘油三酯波动,高糖组的VCAM含量要大于低糖组。 5、上清液MCP-1含量:相同葡萄糖浓度下,持续高甘油三酯及波动性高甘油三脂组测得MCP-1均数均高于低甘油三酯组,波动性高浓度甘油三酯组和持续高浓度甘油三酯组与低浓度甘油三酯组相比明显升高,其他组MCP-1与其相比无明显差异。在高浓度葡萄糖组中,持续高浓度甘油三酯组与低浓度甘油三酯组比较明显升高,其他组较其无明显差异。在同等甘油三酯水平下,高糖组MCP-1较低糖组高。单纯高糖组MCP-1较单纯高浓度甘油三酯组低,而高浓度葡萄糖与高浓度甘油三酯联合培养组含量最高。同等程度的甘油三酯波动,高糖组的MCP-1含量要大于低糖组。 6、上清液MDA含量:相同葡萄糖浓度下,持续高甘油三酯及波动性高甘油三脂均可不同程度增加上清液中炎性产物MDA的表达。但波动性甘油三脂组较其无明显差异。在同等甘油三酯水平下,高糖组MDA较低糖组高。单纯高糖组MDA较单纯高浓度甘油三酯组低,而高浓度葡萄糖与高浓度甘油三酯联合培养组含量最高。同等程度的甘油三酯波动,高糖组的MDA含量要大于低糖组。 7、在相同葡萄糖浓度下,持续高甘油三酯及波动性高甘油三脂均可降低上清液中保护性因子SOD、NO含量,在低葡萄糖浓度组,各组与低浓度甘油三酯组相比明显降低。在联合高浓度葡萄糖组中,与低浓度甘油三脂组相比降低,但波动性高浓度甘油三酯组和持续高浓度甘油三酯组较其明显降低。在同等甘油三酯水平下,高糖组NO和SOD较低糖组低。单纯高糖组NO、SOD较单纯高浓度甘油三酯组高,而高浓度葡萄糖与高浓度甘油三酯联合培养组含量最低。同等程度的甘油三酯波动,高糖组的SOD、NO含量要大于低糖组。 结论: 1、在相同葡萄糖浓度时,波动性甘油三酯和持续中浓度甘油三酯均促进细胞增殖,且低糖并中浓度甘油三酯波动的促增殖作用最大,持续高浓度甘油三酯均抑制细胞增殖,且高糖联合持续高浓度甘油三酯的抑制细胞增殖的作用最强。单纯高浓度甘油三脂对细胞增殖的抑制作用大于单纯高糖。 2、波动性高甘油三酯和持续高甘油三酯对人脐静脉内皮细胞均有炎性损伤,但波动性高甘油三酯对细胞的损伤不大于持续高甘油三酯。单纯高水平的高甘油三脂对细胞的损伤作用大于单纯高糖,高糖联合持续高浓度的甘油三酯对细胞的作用最大,同等甘油三酯波动时,高葡萄糖的炎性损伤作用大于低葡萄糖。 3、波动性高甘油三酯和持续高甘油三酯导致人脐静脉内皮细胞抗氧化能力减弱;但波动性高甘油三酯对细胞抗氧化能力的影响不大于持续高甘油三酯。单纯高水平的高甘油三脂对细胞的抗氧化能力的减弱作用大于单纯高糖,高糖联合持续高浓度的甘油三酯对细胞的抗氧化能力的减弱作用最大。同样的甘油三酯波动时时,高葡萄糖的炎性损伤作用大于低葡萄糖。 4、波动性高甘油三酯和持续高甘油三酯导致人脐静脉内皮细胞功能损伤(NO含量降低),但波动性高甘油三酯对细胞的影响不大于持续高甘油三酯。单纯高水平的高甘油三脂对细胞内皮功能的损伤作用大于单纯高糖,高糖联合持续高浓度的甘油三酯对HUVEC功能的损伤作用最大。同样的甘油三酯波动时时,高葡萄糖对HUVEC的损伤作用大于低葡萄糖。