论文部分内容阅读
目的:观察长期游泳运动后大鼠额叶的初级、次级运动皮质及伏核等脑区c-fos的表达,探讨长期游泳运动过程中c-fos表达及作用的可能机制。材料与方法:健康纯种雄性SD(Sprague Dawley)大鼠110只,随机分为对照组(n=10)、间歇游泳运动组(n=50)、持续游泳运动组(n=50),游泳运动组经过3天适应性训练后,分别以间歇游泳运动方式、持续游泳运动方式进行6周游泳运动训练;对照组常规饲养,不加任何干预。在第6周运动结束后即刻、30min、60min、120min、240min 5个时间点,每一时间点从两运动组各随机选取10只大鼠,腹腔麻醉,其中5只冰上取新鲜脑组织后入液氮保存,另外5只经心依次灌注生理盐水、多聚甲醛、PBS蔗糖后取脑,经过后固定、脱水后4℃保存。对照组与运动后即刻组同时麻醉取材(新鲜取材、固定后取材各5只)。取新鲜脑额叶皮质,提取总RNA、逆转录为cDNA、再与特定引物反应扩增c-fos、β-actin(内参)片段,扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳、凝胶成像系统扫描、photoshop软件分析图像得到c-fos mRNA相对表达量。取灌注后脑标本视交叉以前部分进行冰冻切片,片厚为30μm,隔三取一,切片经PBS漂洗后,3%H2O2孵育,5%小牛血清封闭,加入兔抗鼠c-fos多克隆抗体4℃过夜,漂洗后再与生物素化羊抗兔IgG、SABC反应,DAB显色,0.02%明胶裱片,自然风干后脱水、透明、封片。镜下观察c-fos表达情况,并选取运动皮质、伏核,显微镜下观察并拍照,图像分析软件进行c-fos阳性细胞计数。RT-PCR结果和免疫组化阳性细胞数均应用SPSS软件进行统计学分析,结果用x±s,以P<0.05为有显著性差异。结果:RT-PCR结果:6周游泳运动后,运动组c-fos mRNA表达增加,且显著高于对照组,间歇运动组和持续运动组分别在运动后60min和120min达峰值,随后逐渐下降,但两运动组之间表达无统计学差异。免疫组织化学结果:6周游泳运动后,大鼠额叶c-fos阳性细胞数增多。在初级运动皮质(M1)、次级运动皮质(M2)、伏核(A)呈均匀表达。两种游泳运动后,M1区c-fos阳性细胞最大值都出现在30 min;间歇组M2区c-fos阳性细胞最大值在60 min,而持续组M2区无显著变化;伏核的间歇组最大值出现在60 min,持续组则呈增高趋势,240min仍未见下降。结论:①长期游泳运动后,同种运动的初级运动皮质和次级运动皮质c-fos的表达均增多,但各脑区在表达时程上有差异。可能c-fos参与了运动皮质可塑性的变化及运动调节。②长期游泳运动后,不同运动形式的c-fos表达不同,可能与运动强度及持续时间有关系。