RECQ1通过调控EMT影响非小细胞肺癌侵袭转移并肺癌临床病例分析

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:minghao1122
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目的:RECQ1,属于人类RecQ解旋酶蛋白家族,在五种解旋酶中最含量为丰富。在乳腺癌和宫颈癌细胞中RECQ1被认为是促转移基因。然而,RECQ1是否对非小细胞肺癌也起作用及其潜在的相关机制仍然未知。此外分析肺癌临床病例,探讨影像学检查在肺癌早期诊断方面的研究价值。方法:采用荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPT-PCR)的方法从mRNA水平分析RECQ1基因在三种非小细胞肺癌细胞系和正常支气管上皮细胞系中的表达量差异。在A549细胞中利用慢病毒载体介导的RNA干扰法实现RECQ1基因沉默,选用qRT-PCR和蛋白质免疫印迹(Western blot)的方法分别从mRNA和蛋白水平来检测沉默效率,获得稳定沉默的细胞系。在实验组和对照组中分别采用Cell Counting Kit-8(CCK8)和Transwell小室迁移侵袭实验来探讨RECQ1沉默对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。采用qRT-PCR和western blotting的方法来检测上皮-间充质化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白标志物的mRNA和蛋白水平变化情况,包括E钙黏素(E-cadherin)、N钙黏素(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)。另外,选取6例无明显临床症状的、因体检发现肺部肿块而入院治疗的、包含病理诊断结果的完整肺癌病例进行临床分析,从影像学结果出发,将其与最终病理结果相比较,探讨影像学检查在肺癌早期诊断方面的提示作用。结果:RECQ1的表达水平在三种非小细胞肺癌细胞系A549、HCC827、NCI-H1299中明显高于正常支气管上皮细胞系HBE。敲减RECQ1可显著抑制A549细胞的增殖、迁移、侵袭能力。上皮标志物E-cadherin的mRNA和蛋白水平升高,而间充质标志物N-cadherin和vimentin下降。6份病例中影像检查结果与病理报告相匹配,提示影像学检查可作为肺癌早期诊断的一种不可缺少的重要手段。结论:本实验表明RECQ1是一种重要的调控因子,可通过调控EMT途径来促进非小细胞肺癌进展。RECQ1可作为一种潜在的非小细胞肺癌治疗靶点。影像学检查在早期诊断肺癌方面功效显著,对于肺癌患者的早发现、早治疗起到了很大的促进作用。
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