肿瘤的发生往往与基因突变有关，因此，肿瘤的基因治疗，尤其是靶向基因治疗就有重要意义。 肿瘤特异性增殖腺病毒(即溶瘤腺病毒)，是目前最具前景的靶向基因治疗载体之一。单靶向溶瘤腺病毒的特异性还不够强，故我们又构建了双靶向溶瘤腺病毒载体。腺病毒复制最重要的元件是其E1区，特别是E1A区，我们用癌症特异性启动子hTERT代替E1A本身的启动子，变成AdhTERT。同时我们将E1A CR2区的24bp碱基删除，则E1A(△24)蛋白质不能与Rb结合，抑制了细胞周期。上述构建物简写为AdhTERT·E1A(△24)即为双靶向溶瘤腺病毒载体，此腺病毒只能靶向癌细胞。 传统的外源性启动子如hCWV等调控外源基因表达，由于其活性不受病毒生活史的调控，使其成为一种不安全因素。如用病毒内源性启动子调控外源基因表达可以提高基因治疗的安全性。本实验在构建腺病毒载体时，剔除了腺病毒E3区的6.7K和GP19k基因，仅保留E3区内源性启动子及其调控部分，以达到腺病毒内源性启动子调控外源基因表达的目的。因此，我们构建了小载体pCZ203，缺失E3区以方便插入外源基因。在此基础上，进一步构建了携带外源基因的小载体质粒pCZ204-gene，通过其与含AdhTERT·E1A(△24)的质粒pCN103重组，获得双靶向并由内源性启动子控制外源基因表达的AdhTERT·E1A(△24)E3-gene的病毒，简称AdCN204-gene。其中AdCN204-EGFP的构建是本课题的第一部分内容。实验结果显示，AdCN204-EGFP具有很强的肿瘤靶向性和较高的安全性。 按照导师刘新垣院士所提出的靶向基因病毒治疗策略，我们利用目前非常有应用前景的治疗基因TRAIL构建了AdCN204-TRAIL，深入研究其在体外和体内对肝癌的疗效。实验结果显示，AdCN204-TRAIL能特异地侵入肿瘤细胞并高效介导TRAIL的表达，对体外肿瘤细胞系有明显的杀伤能力，更为重要的是其在体内也显著的抑制了肿瘤生长，有的肿瘤甚至完全消失。这应该是一项很有重要意义的成果。AdCN204-getle的构建方法非常复杂，国际上无人报道过。AdCN204-TRAIL的抗肿瘤效果非常显著，国际上也没有这么好的结果。