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禽伤寒（Fowl Typhoid,FT）是由鸡伤寒沙门菌（Salmonella gullinarum,SG）引起的一种败血性传染病,各个年龄阶段的禽类均易感,死亡率可达10%-50%。由于国内养殖业饲养管理水平较差,不能有效控制鸡伤寒沙门菌在畜禽之间的传播,给养殖业造成了巨大的经济损失。生产上比较常见的是鸡伤寒沙门菌减毒活疫苗,但是减毒活疫苗安全性较低,可能会对环境造成污染。因此研发一种具有高免疫原性的安全疫苗具有十分重要的意义。菌影是指缺少核酸、细胞质和胞质内容物的死菌菌体,它是通过生理生化等方法裂解细菌,在压强作用下使细菌内容物流出,形成的细菌空壳。与传统疫苗相比,菌影完整保留了细菌表面的抗原结构,具有很高的安全性和免疫效应,同时还具有佐剂的性质,且能够载入外源抗原、DNA疫苗、药物等物质,制备方法简单快捷,因此是一种十分优秀的灭活疫苗候选物。本试验拟通过PCR方法克隆E基因和SN基因（Staphylocooccal nuclease A）,构建两个裂解质粒。同时利用自杀质粒介导的方法构建鸡伤寒沙门菌asd缺失株,诱导裂解质粒表达制备菌影。通过动物实验评价菌影的免疫效果,为控制鸡伤寒沙门菌的传播,减少养殖业经济损失提供新的方法。1.裂解质粒和鸡伤寒沙门菌asd缺失株的构建目的:构建裂解性能优良的裂解质粒和鸡伤寒沙门菌asd缺失株。方法:通过PCR方法克隆E基因,利用酶切连接的方法构建裂解质粒p BAD+E。同时PCR克隆SN基因,通过Overlap PCR的方法将其与E基因融合,然后使用酶切连接的方法构建裂解质粒p BAD+ES。以鸡伤寒沙门菌野生株为模板构建自杀质粒,通过自杀质粒介导的方法构建鸡伤寒沙门菌asd缺失株。结论:成功构建了裂解质粒p BAD+E和p BAD+ES以及鸡伤寒沙门菌asd缺失株。2.鸡伤寒沙门菌菌影的制备目的:高效率的制备鸡伤寒沙门菌菌影。方法:将裂解质粒p BAD+E和p BAD+ES分别电转化入鸡伤寒沙门菌asd缺失株感受态细胞中,通过抗生素筛选和基因测序比对的方法筛选出阳性转化子。对阳性转化子进行溶菌动力学试验分析,确定最优的诱导裂解条件,同时比较两个裂解质粒的优劣,确定鸡伤寒沙门菌菌影最优的制备条件,最后扫描电镜观察菌影的形态结构。结论:通过试验可以发现,在裂解率和诱导时间上,裂解质粒p BAD+ES的性能要优于裂解质粒p BAD+E。将含有裂解质粒p BAD+ES的阳性转化子培养至OD600值约为0.4时,诱导2h后,裂解率最高,其裂解率可达99.85%;扫描电镜观察,菌影整体结构完整,在表面可见一个或数个明显的溶菌孔道。3.鸡伤寒沙门菌菌影免疫效果的初探目的:研究鸡伤寒沙门菌菌影对鸡免疫水平的影响。方法:将60只4日龄罗曼雏鸡随机分成三组:菌影疫苗组、灭活苗组和空白对照组,每组20只。适应性饲养一周后,10日龄第一次免疫,共免疫2次,每次间隔2周。分别于免疫前3天、首次免疫和加强免疫后10天进行翅静脉采血,分离血清,以提取的鸡伤寒沙门菌外膜蛋白OMP作为包被抗原,利用间接ELISA方法检测鸡血清Ig G抗体水平。第2次免疫两周后,用野生型鸡伤寒沙门菌进行攻毒。在攻毒后14天内,每天观察并记录鸡死亡数量。通过鸡的体液免疫水平、存活率、内脏病理变化综合评价鸡伤寒沙门菌菌影的免疫保护效果。结论:鸡伤寒沙门菌菌影免疫后无明显的应激反应,可诱导机体产生很好的体液免疫,免疫保护率可达67%。