毒品是当今世界性公害。临床戒毒治疗周期长(一般采用3-6个月的连续给药方案),只有坚持长期用药,才能达到戒毒的临床目的。传统剂型需要频繁给药,而戒毒患者意志薄弱、顺应性差,往往难以坚持到底,造成复吸率极高。研究开发被动给药的长效制剂是解决该问题的一个有效途径。微球注射剂是缓释制剂的代表剂型之一,开发一个月注射一次的微球注射剂可以显著延长给药间隔,提高患者用药的顺应性;药物以注射途径进入体内还能避免戒毒患者因诱惑而自行去除药物导致戒毒的失败。　　盐酸噻吩诺啡(Thienorphine hydrochloride, TNP)是军事医学科学院毒物药物研究所研制的国家一类新药。该药为阿片受体部分激动剂,抗吗啡依赖作用强,有效剂量小,有可能成为一个安全有效的防复吸药物。目前该药无制剂上市,其片剂已获得临床研究批件,规格为0.2、0.5mg/片。　　本课题以PLGA(75/25)分子量15000Da为载体,研制了盐酸噻吩诺啡缓释微球注射剂。本论文主要研究内容包括盐酸噻吩诺啡微球的处方和制备工艺研究、体外释放度试验方法学研究、体外释药机理研究、初步稳定性考察、药动学和药效学研究(包括体内外相关性研究)以及微球的生物相容性研究。　　1 O/W型乳化溶剂挥发法制备盐酸噻吩诺啡微球　　首先采用单因素优化法,考察了理论载药量(A)、PLGA浓度(B)、乳化剂PVA浓度(C)、乳化搅拌速度(D)、油水体积比(E)等影响因素,并采用主成分分析方法对实验结果进行综合分析,结果显示理论载药量(A)、PLGA浓度(B)和乳化剂PVA浓度(C)是影响微球总体质量的主要因素。　　采用星点设计安排实验,效应面法进行优化分析,考察了理论载药量、PLGA浓度、PVA浓度对微球载药量、包封率、平均粒径和第1天微球释药百分数(F1d)的影响。确定了盐酸噻吩诺啡微球的处方和优化工艺。优化后的处方和制备工艺重现性好,制备的微球大小均一,表面光滑圆整,平均粒径为34.74μm,跨距为1.04,微球的包封率为57.3％,载药量为4.57％,F1d为12.17％,体外可持续释药21天。为考察优化处方和工艺进行工业化大生产的可能性,本研究制备了1.5g量的微球,结果表明放大制备的微球性能良好,微球的包封率为64.12％,载药量为5.13％,F1d为14.04％,粒径为35.60μm,跨距为1.20,体外可持续释药21天。　　2盐酸噻吩诺啡微球的质量评价方法学研究　　为控制盐酸噻吩诺啡微球的质量,建立了HPLC微球载药量测定方法、释放介质中盐酸噻诺啡含量测定方法及微球有关物质检查方法,方法准确、灵敏,辅料及降解产物不干扰主药测定。　　3盐酸噻吩诺啡微球体外释放度试验的方法学及体外释药机理研究　　在微球的体外释药研究中,由于国内外目前尚无统一或公认的方法,所以分别采用了不同的释药方法进行释药研究,并对释药结果和释药方法进行了综合评价。由于盐酸噻吩诺啡在水中不溶或几乎不溶,因此首先进行了释放介质的筛选。结果表明采用5％乙醇水溶液作为体外释放介质可以满足“漏槽条件”,且在该介质中盐酸噻吩诺啡能够保持稳定。针对直接释药法和透析释药法各自存在的弊端,对体外释放条件进行了考察。进行直接释药法研究时,考察了释放介质的体积对微球体外释放度的影响;进行透析释药法研究时,考察了透析袋内溶液的浓度对药物扩散速率和渗透系数的影响,以及透析袋内溶液的体积对微球释药速度的影响。利用高温和酸性条件下PLGA的水解速度加快的原理,本文建立了加速释药的方法。对长期释药试验和加速释药试验的释放度数据进行点点对应的相关性拟合,结果显示盐酸噻吩诺啡微球加速释药1小时累积释药百分数 Y与长期释药1天的累积释药百分数y有以下相关性:Ln(100-y)=3.1192Ln(100-Y)-8.8383, R2=0.9677,加速释药法可以用来预测微球长期释药的释放速率。　　通过失重法间接了解PLGA微球的降解速度。采用Higuchi、零级和一级方程对体外释药曲线进行拟合。结果表明盐酸噻吩诺啡微球体外释药曲线符合零级方程,这主要是降解和扩散机制共同作用的结果。　　4盐酸噻吩诺啡微球的初步稳定性研究　　盐酸噻吩诺啡微球采用60Co照射γ射线灭菌,结果显示微球经100万 rad辐射后,药物的稳定性和微球释药行为与辐射前相比没有明显变化。影响因素实验表明光和热对微球的稳定性影响明显。加速试验和长期稳定性试验的结果表明,盐酸噻吩诺啡微球应避光保存于4℃的环境中。　　5盐酸噻吩诺啡微球体内过程研究　　以对抗吗啡镇痛效果的拮抗率和拮抗维持时间长短来观察盐酸噻吩诺啡微球的药效。盐酸噻吩诺啡微球A剂量组有效拮抗时间为15天,B剂量组有效拮抗时间为21天,C剂量组和D剂量组有效拮抗时间均为28天。从四个剂量的拮抗率曲线中可以发现,盐酸噻吩诺啡微球的有效拮抗率作用随剂量的增大而增强呈剂量依赖关系。　　以大鼠作为模型动物,采用LC/MS/MS法测定血浆中噻吩诺啡的浓度。通过血浆药物浓度的测定来评价微球在体内的缓释效果。突释主要表现在注射微球后的第1天,血药浓度达到峰值(4.79ng·mL-1),第3天以后微球的释药速度减慢,血药浓度和对吗啡的拮抗作用逐渐降低。第5天后血药浓度上升并达到平台期(平均2.47ng·mL-1),与药效学研究中微球在释药中期药效平稳的趋势吻合。第21天后血药浓度开始下降,至第28天时,血药浓度下降至(1.54ng·mL-1)。初步考察了盐酸噻吩诺啡微球在比格犬体内的血药浓度,就目前得到的数据结果表明盐酸噻吩诺啡微球在比格犬体内的释药特征与在大鼠体内类似,达到了缓释的效果。　　在体内外相关性研究中,通过测定不同时间点微球在注射部位的药物残留量,计算微球的体内释药百分数。用梯形法计算盐酸噻吩诺啡微球相应的AUC0→T,通过AUC0→T和AUC0→∞的比值作为体内吸收百分数(Fa)。对体内外数据进行点点对应的相关性评价。体内外相关性研究表明,盐酸噻吩诺啡微球无论采用直接释药法还是透析释药法测定的体外释放度与体内释药百分数及体内吸收百分数(Fa)之间都具有显著的体内外相关性。　　对体内释药曲线进行拟合,结果表明盐酸噻吩诺啡微球的体内释药曲线符合Higuchi方程。　　在微球生物相容性研究中,对注射部位进行了肉眼直接观察和组织切片采用显微镜进行病理观察。结果表明,盐酸噻吩诺啡微球具有良好的生物相容性。