论文部分内容阅读
远缘杂交育种技术将异种属物种的有利性状相互融合,可以创造新的物种,突破常规育种的限制,是今后育种的重要方向。植物远缘杂交可能会造成核仁显性现象,即源于一个亲本的rRNA基因沉默,而源于另一个亲本的rRNA基因表达。本研究采用人工去雄授粉的方法,以萝卜(Raphanus sativus L. RR,2n=18)为母本、芥蓝(Brassica alboglabra Bailey, CC,2n=18)为父本进行杂交,并通过胚抢救(Embryo Rescuing)得到了6棵F1代植株,经形态学观察,初步确定均为杂交所得。本研究通过去壁低渗火焰干燥法获得萝卜、芥蓝、F1代和F10代以上植株的子房染色体涂片,亲本基因组DNA采用CTAB法提取。用Bio-11-dUTP标记的萝卜基因组做探针,通过原位杂交发现F1代每个分裂相中的18条染色体中并不全是一半来自父本,一半来自母本,这可能与杂种细胞中发生染色体重组有关,但可以表明其均为萝卜和芥蓝杂交所得;用Dig-11-dUTP标记的45S rDNA质粒做探针,通过原位杂交发现萝卜和芥蓝子房染色体涂片中每个分裂相都含有4个45 S rDNA位点;以Bio-11-dUTP标记的萝卜基因组和Dig-11-dUTP标记的45S rDNA质粒做双探针,原位双杂交结果发现,F1代和F1o代以上的子房染色体分裂相中分别含有4个和8个45S rDNA位点,F1代中两亲本的各占一半,而F1o代以上却发现5个45SrDNA位点来自母本,3个来自父本,这可能也与染色体重组有关。但是在杂种细胞中,都含有来自两亲本的45S rDNA位点。本研究采用同源序列法克隆出芥蓝rRNA基因间隔区序列,并与萝卜rRNA基因转录起始位点(+1)之后的序列比对,设计通用引物,进行RT-PCR,凝胶回收RT-PCR产物并测序,序列比对结果表明,F1代和F10代以上RT-PCR产物序列与芥蓝的一致。因此,可以看出萝卜芥蓝远缘杂交中同样诱发了核仁显性现象:来自芥蓝的rRNA基因表达,而来自萝卜的rRNA基因沉默。