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研究背景经前期综合征(premenstrual syndrome, PMS)是育龄女性群体于黄体期发生的生理、心理周期性病理变化，属情志病症范畴。中医研究发现，肝气逆为其主证，临床多表现为乳房、小腹胀痛，情绪烦躁、焦虑，及睡眠障碍等，病机为肝气疏泄太过所致亢奋性功能失衡。现代研究结果显示，兴奋性神经递质谷氨酸（Glutamic acid, Glu）和抑制性神经递质γ-氨基丁酸（aminobutyric acid, GABA）均参与了PMS的病机。已知Glu与GABA可在谷氨酸脱羟酶（Glutamic aciddecarboxylase, GAD）、氨基丁酸转氨酶（aminobutyric aminotransferase, GABA-T）、及氨基丁酸转运体-1（aminobutyric acid transport body1, GAT-1）三种关键酶的调节下，完成相互转化的过程，形成完整的Glu-GABA代谢通路。目前，国内外未见Glu-GABA这一代谢通路与PMS肝气逆证发病机制之间的系统化研究，本研究以此为基点展开实验和论述。研究目的本研究通过病证结合大鼠模型，重点分析多个脑区内Glu-GABA代谢通路三种关键酶和Glu、GABA两大神经递质的动态变化，以及调肝方药的干预效果，以期为PMS肝气逆证发病机制和相关用药机理提供依据。研究方法1PMS肝气逆大鼠模型的制备及行为学评价采用阴道涂片镜检法及旷场评分筛选宏观行为学指征相近、动情周期规律的非接受期大鼠96只纳入实验，随机分为空白组、模型组、氟西汀组及白香丹组各24只。模型组大鼠以常规电刺激法制备PMS肝气逆模型，氟西汀组大鼠在电刺激的基础上灌胃给予氟西汀，白香丹组大鼠在电刺激的基础上灌胃给予白香丹，空白组大鼠正常饲养，每天给予等剂量的蒸馏水。所有大鼠均于造模前、造模后称量体重、进行旷场实验评分，作为其宏观行为学评价指标。2微观指标的检测所有大鼠均于造模结束当天断头、取脑、分离脑组织（左海马、右海马、下丘脑、额叶皮质），储存于-70℃超低温冰箱待检。采用高效液相测定各脑区Glu与GABA的含量；采用Trizol法提取各脑区总RNA，常规RT-PCR法测定GAD65、GAD67、GABA-T、GAT-1的mRNA表达；采用BCA试剂盒提取各脑区总蛋白，常规Western-blot法测定GAD65、GAD67、GABA-T、GAT-1的蛋白表达。研究结果1宏观行为学评价结果⑴体重：造模前四组大鼠初始体重及适应性饲养体重均无显著性差异，造模后，模型组大鼠体重显著降低（P<0.05）；氟西汀组和白香丹组大鼠体重无显著变化。⑵四组大鼠造模前旷场无显著性差异，造模后，模型组和氟西汀组大鼠旷场值均显著升高（P<0.05），白香丹组无显著变化。2微观指标测定结果⑴Glu与GABA的脑区含量：与空白组相比，模型组GLU含量均显著升高（P<0.05）；GABA含量显著降低（P<0.05）。与模型组相比，氟西汀组大鼠各脑区GLU显著升高（P<0.05）白香丹组显著降低（P>0.05）；两组GABA含量均显著升高（P<0.05）。⑵GAD65/67、GABA-T、GAT-1的mRNA表达与空白组相比，模型组GAD65/67mRNA表达量显著降低（P<0.05），GABA-T、GAT-1mRNA表达量显著升高（P<0.05）；与模型组相比，氟西汀组和白香丹组各脑区GAD65/67mRNA表达均显著升高，GABA-T、GAT-1mRNA表达量均显著降低（P<0.05）。⑶GAD65/67、GABA-T、GAT-1的蛋白表达与空白组相比，模型组各脑区GAD65/67蛋白表达显著降低（P<0.05），GABA-T、GAT-1蛋白表达量显著升高（P<0.05）；与模型组相比，氟西汀组和白香丹组各脑区GAD65/67蛋白表达均显著升高（P<0.05），GABA-T、GAT-1蛋白表达量均显著降低（P<0.05）。研究结论1白香丹和氟西汀均可改善PMS肝气逆证大鼠体重，且白香丹对稳定PMS肝气逆证大鼠负面情绪表现出更为显著的疗效。2PMS肝气逆证的发病机制可能与中枢各脑区Glu及GABA的比例失调有关，而与单一的Glu或GABA含量变化无显著相关性。3中枢脑区GAD65、GAD67mRNA及蛋白表达下调，GABA-T、GAT-1mRNA及蛋白表达上调，均可抑制GABA活性，可能为PMS肝气逆证发病机制的重要环节；白香丹和氟西汀均可通过介导这一环节发挥抗PMS肝气逆作用。4氟西汀与白香丹的作用方式有所差异，氟西汀可能通过升高兴奋性神经递质Glu含量发挥Glu-GABA代谢通路激活样作用，在此基础上上调GAD65与GAD67的表达，促使GABA合成量增加，同时，下调GAT-1与GABA-T的表达，减少GABA-Glu的转化和GABA的灭活摄取，发挥GABA/Glu比例调节作用；而白香丹可能通过直接上调GAD65与GAD67表达、下调GAT-1与GABA-T表达，发挥GABA/Glu比例调节作用。