【摘 要】
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目的异染色质蛋白1γ(CBX3)连接组蛋白甲基化从而发挥转录沉默、DNA修复、RNA剪切等功能。研究CBX3在结肠癌中的生物学作用及其相关机制有利于为肿瘤诊断、治疗提供新的靶点
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目的异染色质蛋白1γ(CBX3)连接组蛋白甲基化从而发挥转录沉默、DNA修复、RNA剪切等功能。研究CBX3在结肠癌中的生物学作用及其相关机制有利于为肿瘤诊断、治疗提供新的靶点。方法运用IHC和Western Blot方法分别检测人结肠癌组织及其癌旁组织CBX3的表达;利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲出HCT116细胞中的CBX3并构建稳定细胞系;通过MTS、EDU、克隆形成实验及流式细胞仪检测CBX3对结肠癌细胞增殖、周期、凋亡的影响;qRT–PCR筛选CBX3影响结肠癌细胞周期G1-S期相关靶点,Western Blot和免疫荧光进一步在蛋白水平上验证;运用慢病毒质粒干扰及过表达实验、激酶抑制实验分析CBX3、CDK6、p21三者之间的关系;通过裸鼠成瘤实验在体内验证CBX3对结肠癌发生发展中的作用;IHC和Western Blot进一步分析CDK6与p21在人结肠癌中的表达关系。结果CBX3在结肠癌组织中显著高表达;敲出CBX3明显抑制结肠癌细胞增殖及细胞周期G1-S期进展,促进下游靶点CDK6和p21上调;CDK6在缺乏CBX3时能通过独立于激酶的活性调控p21表达限制细胞过度增殖;CBX3在裸鼠体内能够影响结肠癌细胞发生发展。结论CBX3通过抑制CDK6/p21的表达促进结肠癌发生发展,从而破坏了CDK6的负反馈调节机制。
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