长期以来,恶性肿瘤对人类生命健康构成了严重威胁。药物治疗作为肿瘤治疗的主要手段,一直受到人们的重视。临床上常用的抗肿瘤药物有50多种,但大多数药物只能使病情缓解,无法达到完全治愈的目的,所以抗肿瘤新药的开发一直是药物研究领域的主要方面。占地球生物资源80%的海洋生物,拥有丰富的代谢途径,可产生大量结构新颖、作用独特的代谢产物,是抗肿瘤活性物质的重要来源。海洋微生物由于种类繁多、采样容易、无资源再生之忧等优点,是当前倍受重视的抗肿瘤药物的新资源。 为了从海洋微生物中筛选具有抗肿瘤活性的菌株,首先我们建立了镰刀菌筛选模型,并运用抗肿瘤药物对其进行验证,结果表明该模型适用于抗肿瘤活性物质的筛选。将镰刀菌模型与细胞毒模型相结合形成了抗肿瘤组合筛选模型,运用该模型对分离到的海洋放线菌进行筛选,结果表明该模型具有处理量大、漏筛率低、快速、结果真实可靠的特点,可用于对具有抗肿瘤活性的海洋微生物大规模的筛选。 从采集到的75份样品中共分离得到2042株菌落形态有差异的微生物,其中细菌1269株,放线菌395株,真菌378株。通过抗肿瘤组合模型的筛选,共得到242株具有抗肿瘤活性的菌株(ID₅₀>50),其中细菌为136株,放线菌为83株,真菌为23株。在这242株菌中,有76株菌的ID₅₀在200以上,且产生活性物质的遗传稳定性良好。 经过活性检测,发现菌株B2817的发酵液对肿瘤细胞具有选择抑制活性,其对人肝癌细胞SMMC-7721、小鼠肉瘤细胞S180、人鼻咽癌细胞CNE的ID₅₀值都在1000以上,而对人肝细胞L-02无抑制活性。 通过对菌株B2817的形态、生理生化、遗传等特征的研究,发现菌株B2817属于弧菌属,与Vibrio.rubber、Vibrio.gazogenes的亲源关系最近,16S rDNA的同源性分别为98%、95%。但三者存在很大差异,菌株B2817与Vibrio rubber、Vibrio.gazogenes基因组DNA之间的杂交率也只有40.12%、37.62%。总结各种鉴定指标发现菌株B2817是弧菌属中一个新种,将其命名为Vibrio spongia.。 通过对菌株B2817合成抗肿瘤活性物质发酵工艺的研究,得到了其最佳