特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis IPF)是间质性肺纤维化疾病,其病因不明、发病率高、难诊断、难治疗。病理改变集中在肺泡上皮细胞减少、肺泡塌陷、变形及残存组织连接、间质细胞增生、纤维化形成。现代研究表明IPF的机制研究与上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)假说有关,EMT可在起始阶段开启纤维化,亦可在纤维化阶段促使胶原沉积,瘢痕改变,纤维化形成。IPF在中医被归于“肺痹-肺痿二元论”,其基本病机是气虚血瘀,本课题组致力于用益气活血代表方-补阳还五汤来干预IPF的形成。目的:此次实验旨在观察补阳还五汤对IPF大鼠纤维化阶段EMT指标的影响,探讨补阳还五汤能够发挥抗纤维化的作用机制进程是否与EMT假说有关。方法:将SPF级SD大鼠72只,随机分为假手术组、阳性组、补阳还五汤的高中低三个剂量组及模型组,每组12只。采用一次性气管内注射药物的方法复制疾病模型,除假手术组注射生理盐水,其余各组注射BLM生理盐水,造模第二天开始给药,中药各组分别予不同浓度的免煎中药,阳性组予泼尼松,模型组和假手术组予纯水,每天一次。第28天处死后取组织,采用HE和Masson染色观察肺组织病理变化来判断纤维化程度;采用ELISA检测TGF-β含量,免疫组化检测Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、E-cad及western blot检测α-SMA等蛋白含量;用SPSS21.0统计分析,得出结果。结果:1、HE和masson染色:与假手术组比,模型组出现大量肺泡上皮细胞增生、伴炎性细胞浸润、肺泡壁增厚、腔内充斥巨噬细胞浸润灶、壁上分布浅蓝色着染纤维增多等病理改变。与模型组相比,给药组肺组织内有肺泡上皮细胞增生、炎性细胞浸润,腔内有巨噬细胞灶,肺泡壁增厚,增厚的壁上分布有浅蓝色着染纤维,肺纤维化程度积分均有减轻。2、Elisa、免疫组化及WB的结果:(1)TGF-β1:与假手术组比,模型组表达显著上调(P<0.01),与模型组相比,阳性对照组显著降低(P<0.01),补阳还五汤各组的TGF-β1含量均显著下降(P<0.01);(2)Col-Ⅰ和α-SMA:与假手术组比,模型组表达显著上升(P<0.01),与模型组相比,阳性对照组表达下降(P<0.05),补阳还五汤各组的Col-Ⅰ表达显著降低(P<0.01),α-SMA表达减少(P<0.05);(3)E-cad和Col-Ⅲ:与假手术组比,模型组表达显著下降(P<0.01),与模型组相比,阳性对照组E-cad显著增多(P<0.01),Col-Ⅲ表达上调(P<0.05),补阳还五汤各组的E-cad显著增多(P<0.01),Col-Ⅲ表达上升(P<0.05)。结论:补阳还五汤在纤维化阶段可能发挥抗纤维化的作用与EMT假说有关。