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[目 的]:1.探究HSP70-hom+2437位点C、T等位基因对SD大鼠MCAO模型是否具有保护作用。2.探究HSP70-hom+2437位点C等位基因和T等位基因对大鼠MCAO模型的作用是否有差异性。3.通过检测凋亡率及各组大鼠梗死周边区HSPA1L、PI3K、p-AKT、Bax、Bcl-2、cleaved-caspase3蛋白表达水平探究HSP70-hom+2437位点C、T等位基因对大鼠MCAO模型发挥作用的可能机制,及两种等位基因对大鼠MCAO模型产生差异效应的机制。[方 法]1.侧脑室定位注射:将65只220-240g雄性SD大鼠随机分成5组,模型组、生理盐水组、阴性对照病毒组、C等位基因组、T等位基因组(n=13)。模型组不进行侧脑室注射,生理盐水组、阴性对照病毒组、C等位基因组、T等位基因组分别注射等量或等病毒颗粒的生理盐水、空载对照病毒、过表达C等位基因慢病毒、过表达T等位基因慢病毒。慢病毒注射第7天,各组随机3只大鼠取脑组织进行western blot和qPCR检测目的蛋白在脑组织中的过表达情况,确保过表达动物模型制备成功。2.建立大鼠MCAO模型:侧脑室定位注射7天,各组大鼠通过线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉栓塞模型,将赖氨酸包被头端的尼龙线从颈总动脉近分叉口处插入,经颈内动脉入颅,直至进入大脑中动脉的起始段,将大脑中动脉的血流阻塞,线栓结扎,形成永久性大脑中动脉栓塞模型。3.神经功能缺损评分:MCAO模型制作后24h,采用Longa五分法评估神经功能缺损严重程度。4.TTC染色测梗死面积:各组大鼠于MCAO模型后24h处死取脑组织。一部分大鼠处死后取脑组织进行TTC染色,组织用脑槽切成厚度2mm厚的切片,1%TTC置于37℃染色15min,然后4%多聚甲醛固定6h,相机拍照,Image J软件测各组大鼠脑梗死体积百分比。5.Tunnel染色测组织细胞凋亡率:各组大鼠同取第3片组织切片用4%多聚甲醛固定24h后进行石蜡包埋切片,包埋好的石蜡切片进行脱蜡、修复后tunnel染色,DAPI染核。抗荧光猝灭剂封片后于荧光显微镜下拍照采集图像,Image J软件计数各组大鼠脑组织细胞凋亡率。6.Westem blot 测各组大鼠脑梗死周边区 HSPA1L、PI3K、p-AKT、Bax、Bcl-2、BDNF、cleaved-caspase3蛋白表达:取梗死周边区脑组织提取总蛋白后用westem-blot法测各个凋亡相关蛋白的相对表达情况。运用Image J软件进行灰度统计分析。[结 果]1.Western blot和qPCR测目的基因在脑组织内过表达:侧脑室注射过表达慢病毒第7天,模型组、生理盐水组和阴性对照病毒之间HSP70-hom mRNA及HSPA1L蛋白水平无明显差异,而与模型组、生理盐水组和阴性对照病毒组相比,过表达C和T等位基因组HSP70-hommRNA含量明显增高(p<0.05)。相对于模型组,C、T等位基因组HSPA1L蛋白含量分别增高60%和62%(P<0.05),而C、T等位基因组之间mRNA和蛋白水平的的差异无统计学意义(P>0.05)。2.神经功能缺损评分:大鼠MCAO模型24h后,模型组、生理盐水组和阴性对照病毒组神经功能缺损评分未见明显差异,与模型组、生理盐水组和阴性对照病毒组相比,过表达C、T等位基因能明显降低神经功能缺损评分(P<0.05)。过表达C、T等位基因两组间无明显差异(P>0.05)。3.TTC染色测脑梗死面积:各组大鼠MCAO模型24h后脑梗死体积百分比分别是分别是43.28%、43.62%、42.52%,35.60%、30.81%,前三组脑梗死体积无统计学差异(P>0.05),与前三组相比,C、T等位基因组梗死面积能减小(P<0.05),且T等位基因组梗死体积比C等位基因组降低更明显(P<0.05),保护作用更强。4.Tunnel染色测组织细胞凋亡率:模型组、生理盐水组和阴性对照病毒组之间细胞凋亡未见明显差异,与模型组、生理盐水组、阴性对照病毒组相比,C、T等位基因组细胞凋亡率降低(P<0.05),与C等位基因组相比,T等位基因组凋亡率更低(P<0.05),对凋亡抑制作用更强。5.各组大鼠脑组织相关凋亡蛋白的表达:与模型组、生理盐水组、阴性对照病毒组相比,C、T等位基因抑制凋亡蛋白HSPA1L、pAKT蛋白表达水平明显增高,促凋亡蛋白Bax的表达水平明显降低。与C等位基因组相比,T等位基因组Bax蛋白的降低水平更加明显(P<0.05)。[结 论]1.过表达HSP70-hom能降低MCAO模型大鼠的神经功能缺损评分。2.过表达HSP70-hom能减小MCAO模型大鼠脑梗死体积,且与C等位基因组相比,过表达HSP70-hom+2437位点T等位基因组脑梗死体积更小,降低更加显著。3.过表达HSP70-hom能降低MCAO大鼠缺血侧脑组织细胞凋亡率,与C等位基因组比较,T等位基因组细胞凋亡率更低,HSP70-hom对MCAO模型保护作用可能与抑制细胞凋亡有关。4.过表达HSP70-hom大鼠缺血侧脑组织内HSPA1L、pAKT蛋白表达水平增高,Bax的表达水平降低,HSP70-hom可能正是通过上调HSPA1L、p-AKT蛋白表达,下调Bax表达来发挥对大鼠MCAO模型的保护作用,且HSP70-hom+2437位点C、T等位基因对大鼠MCAO模型的差异作用可能与Bax表达水平相关。