铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)为兰科石斛属多年生附生草本植物,是我国传统中药材中最为珍稀名贵的品种之一,为“九大仙草”之首。铁皮石斛具有益胃生津、滋阴清热、清肺明目、抗癌防老的功效。随着市场对铁皮石斛的需求量增加,铁皮石斛种植面积持续上升,种苗的需求量大,此外设施栽培的普遍应用以及栽培年限的增加,铁皮石斛病害的发生日趋严重,阻碍了产业发展。已有研究发现铁皮石斛内生菌资源丰富,具有生防和促生活性。因此,本研究从仿野生铁皮石斛中分离筛选得到拮抗菌,分析其在生物防治、促进铁皮石斛种子萌发及生长方面的作用。旨在为防治铁皮石斛病害和促进铁皮石斛生长提供物质资源。本研究获得的结果如下:1、从龙泉仿野生铁皮石斛根、茎、叶中分离得到24株细菌和8株真菌,以胶孢炭疽菌(Colledtrichum gloeosporides)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)为供试病原菌筛选得到一株具有较好拮抗作用的真菌,命名为DT-1,经形态学鉴定和分子生物学鉴定为踝节菌属(Talaromyces)真菌;2、对拮抗菌DT-1进行抗菌谱测定,发现DT-1对7株常见病原菌较好的拮抗作用。拮抗菌DT-1的发酵液能有效抑制胶孢炭疽菌的生长,生长速度较普通培养基上的病原菌显著降低。从发酵液中提取得到菌株DT-1的次生代谢产物,该产物能有效抑制胶孢炭疽菌的菌丝生长,且新生菌丝顶端变细开叉,杂乱稀疏。3、拮抗菌DT-1发酵液对铁皮石斛组培苗具有促生作用。平均发芽数高达7.67个,平均生根数高达8.54根,为对照组的两倍多。对DT-1次生代谢产物进行HPLC分析发现,菌株DT-1的次生代谢产物中生长素(Indole-3-acetic acid,IAA)浓度为3.23 ng/m L,玉米素(Zeatin,ZT)浓度为67.5μg/m L,赤霉素(Gibberellin,GA)浓度为3.42μg/m L。4、拮抗菌DT-1对铁皮石斛种子萌发具有促进作用。经果胶酶、纤维素酶、溶菌酶和蜗牛酶酶解种皮,20 mg/m L的果胶酶和50 mg/m L的蜗牛酶酶解效果最好。种子经不同孵育液处理后得出10%的DT-1发酵液与10%MS溶液对种子具有较好的萌发作用。