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该文开发了适于重组BHK细胞生长和vWF蛋白表达的无血清培养基SFMA,在SFMA无血清培养基的基础上对有血清和无血清培养条件下重组BHK细胞生长、代谢和vWF蛋白表达规律进行了系统的研究,并以此为依据进行了无血清悬浮流加培养.此外,对渗透压、温度、以及丁酸钠对重组BHK细胞生长、代谢和vWF蛋白表达的影响也进行了较为系统的研究.采用HADAMARD统计设计方法建立了适于重组BHK细胞培养和vWF蛋白表达的无血清培养基SFMA,在无血清悬浮流加培养过程中,大大延长了细胞培养时间,细胞密度增加了20倍,vWF蛋白表达达到6.4IU/ml.通过重组BHK细胞在无血清和有血清批培养下的比较,发现细胞生长和代谢有明显的不同.重组BHK细胞的细胞对葡萄糖得率系数和乳酸对葡萄糖得率系数,远小于CHO细胞和杂交瘤细胞,无血清培养条件下乳酸对葡萄糖得率系数值比有血清培养条件下更低.在无血清和有血清的培养条件下重组BHK细胞均表现出较CHO细胞和杂交瘤细胞高的葡萄糖比消耗速率,而且无血清培养条件下细胞表现出更高的葡萄糖比消耗速率.在无血清培养条件下,谷氨酰胺的比消耗速率明显下降.在重组BHK细胞的无血清悬浮流加培养中,葡萄糖浓度控制在8.7 mmol/L,不会成为细胞生长的限制因素.随着培养基渗透压的升高,细胞的葡萄糖和谷氨酰胺代谢明显增强,代谢过程更倾向于能量生产,用于生物合成途径的比例下降,同时更多的氨基酸用于胞内氨基酸池的积累,合成更多的胞内蛋白以弥补渗透压造成的影响.渗透压升高后胞内的天冬氨酸、甘氨酸、精氨酸、丙氨酸、缬氨酸、丝氨酸浓度均出现较明显的升高趋势,但在升高渗透压6 h后即趋于相对稳定.渗透压的升高不会明显改变重组BHK细胞群体中G<,0>/G<,1>期细胞的分布比例,但S期细胞的分布比例有所提高.相对于37℃培养温度,升高温度和降低温度对细胞生长都存在一定程度的抑制,降低温度培养条件下的抑制作用更明显,主要表现为延长了细胞生长的迟滞期,在细胞生长进入对数生长期后,培养温度对细胞的生长影响则不明显.培养温度的变化对群体细胞中处于S期的细胞比例影响不大,但在33℃和39℃培养条件下,群体细胞中处于G<,0>/G<,1>期的细胞比例有较明显升高.在实验范围内,发生凋亡的细胞在群体细胞中所占百分数随着培养温度的升高而提高.温度变化和丁酸钠的添加均可提高vWF蛋白的表达水平,但温度、渗透压以及丁酸钠对蛋白表达水平的促进作用并不是完全叠加的,在该实验系统下,采用39℃、370mOsmol/kg以及2 mmol/L丁酸钠浓度的阶段培养可将vWF蛋白表达水平提高25％.