论文部分内容阅读
目的:通过检测不同浓度姜黄素处理后Hela细胞中ERRα的转录、蛋白水平表达产物的差异性以及细胞的凋亡率的差异,从而探讨姜黄素对Hela细胞的作用,ERα是否为姜黄素影响Hela细胞凋亡的作用靶点。 材料方法:1、研究对象:人宫颈癌Hela细胞。2、实验方法:应用AnnexinⅤ-APC流式细胞仪检测方式检测不同浓度(0μM、10μM、20μM以及40μM)姜黄素处理后Hela细胞的凋亡率;应用蛋白免疫印迹法(western blot)检测不同浓度姜黄素处理后Hela细胞中ERRα的蛋白表达水平;应用实时荧光定量PCR(qPCR)检测不同浓度姜黄素处理后Hela细胞中ERRα转录水平的表达。3、统计学方法:用SPSS20.0软件进行统计学分析;Hela细胞的凋亡率以及ERRα转录、翻译水平的表达与对照组之间的差异用单因素方差分析;Hela细胞凋亡率和ERRα转录、翻译水平表达之间的相关性检测用spearman相关统计法分析。 结果:1、姜黄素对Hela细胞凋亡的影响:对照组(姜黄素处理浓度为0μM)Hela细胞凋亡率为3.96±0.13%,10μM浓度姜黄素处理组凋亡率为4.55±0.30%,20μM浓度姜黄素处理组凋亡率为7.78±0.10%,40μM浓度姜黄素处理组凋亡率为54.63±0.64%。经统计学分析,各组间的凋亡率不完全相同(F=14112.78,P<0.001);10μM浓度姜黄素处理组相对于对照组凋亡率的差异无统计学意义,20μM浓度姜黄素处理组相对于对照组凋亡率的差异有统计学意义(P<0.05),40μM浓度姜黄素处理组相对于对照组凋亡率的差异有统计学意义(P<0.05)。2、姜黄素对Hela细胞中ERRα蛋白表达的影响:对照组Hela细胞中ERRα蛋白的表达水平为1.84±0.36,10μM浓度姜黄素处理组中ERRα蛋白的表达水平为1.42±0.21,20μM浓度姜黄素处理组中ERRα蛋白的表达水平为0.95±0.08,40μM浓度姜黄素处理组中ERRα蛋白的表达水平为0.27±0.05。经统计学分析,各组间ERRα蛋白表达水平不完全相同(F=30.10,P<0.001);10μM浓度姜黄素处理组相对于对照组之间的差异无统计学意义,20μM浓度姜黄素处理组相对于对照组之间的差异具有统计学意义(P<0.05),40μM浓度姜黄素处理组相对于对照组之间的差异具有统计学意义(P<0.001)。3、姜黄素对Hela细胞的ERRα转录水平产物的影响:对照组Hela细胞中ERRα转录水平产物的2-ΔΔCt为1.00±0.13,10μM浓度姜黄素处组中ERRα转录水平产物的2-ΔΔCt为2.59±0.25,20μM浓度姜黄素处理组中ERRα转录水平产物的2-ΔΔCt为4.81±0.37,40μM浓度姜黄素处理组中ERRα转录水平产物的2-ΔΔCt为75.18±5.11。经统计学分析,各组间ERRα mRNA表达水平不完全相同(F=598.54,P<0.001);10μM、20μM浓度姜黄素处理组相对于对照组之间的差异均无统计学意义,40μM浓度姜黄素处理组相对于对照组之间的差异具有统计学意义(P<0.05);相对于40μM浓度姜黄素处理组,0μM、10μM以及20μM浓度姜黄素处理组与之间的差异均具有统计学意义(P<0.05)。4、不同浓度姜黄素处理后细胞凋亡率与ERRα表达水平的相关性:经Spearman相关性分析显示不同浓度姜黄素处理后Hela细胞凋亡率与ERRα蛋白表达呈负相关(r=-0.838,P<0.001)。5、不同浓度姜黄素处理后凋亡率与ERRα转录水平的表达的相关性:经Spearman相关性分析显示不同浓度姜黄素处理后Hela细胞中ERRα转录水平产物的2-ΔΔCt与Hela细胞的凋亡率具有相关性(r=0.944,P<0.001)。 结论:姜黄素促进入宫颈癌Hela细胞的凋亡,呈剂量依赖性,且在浓度为40μM时最为明显;在翻译水平,姜黄素减低Hela细胞中ERRα蛋白的表达水平,随着姜黄素浓度的增加,Hela细胞中ERRα蛋白的表达水平有下降趋势,当姜黄素浓度为40μM时具有显著统计学差异;在转录水平,姜黄素提高Hela细胞中ERRα mRNA的表达水平,随着姜黄素浓度的增加,Hela细胞中的ERRα mRNA有增高趋势,当姜黄素浓度为40μM时具有显著的统计学差异;姜黄素处理后Hela细胞的凋亡率与ERRα表达呈负相关,这说明姜黄素可能作用于ERRα来促进Hela细胞的凋亡,这可能为姜黄素用于治疗宫颈癌提供新的靶点以及验室证据。