粉防己碱对三阴乳腺癌细胞HCC1937作用及生物学特性的影响

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研究目的:三阴乳腺癌是一类恶性程度高、治疗困难、临床预后差的乳腺恶性肿瘤。HCC1937细胞系三阴乳腺癌中常见的细胞类型,本课题在既往研究基础上,通过体外实验分析粉防己碱对三阴乳腺癌细胞HCC1937的影响,为粉防己及药物成分的临床应用奠定理论研究基础。方法:用MTT方法检测经不同浓度粉防己碱干预的人三阴乳腺癌HCC1937细胞光吸收值(OD值)在24h、48h、72h、96h时间点的变化情况。通过剂量-效应曲线、时间-效应曲线、半数抑制浓度(IC50),以及统计结果分析阐明粉防己碱对人三阴乳腺癌细胞HCC1937体外生长的影响。利用倒置相差荧光显微镜观察不同浓度粉防己碱干预后人三阴乳腺癌HCC1937细胞的形态学变化,探究粉防己碱的作用效果。利用AnnexinV-FITC、PI双标记细胞凋亡检测法检测粉防己碱4个不同浓度组对人三阴乳腺癌细胞HCC1937干预24h后细胞凋亡程度的差异,探究药物剂量对肿瘤细胞凋亡的影响。采用免疫组化法分析凋亡相关基因Bcl-2、Bax及钙粘蛋白E-cadherin表达水平的变化,探究粉防己碱对HCC1937细胞的作用机制。结果:粉防己碱对三阴乳腺癌细胞HCC1937的体外生长有明显的抑制作用,呈现出显著的剂量效应和时间效应,随药物浓度增加及作用时间的延长抑制作用增强,且时间与药物剂量间存在交互效应。细胞形态学研究显示,粉防己碱使得体外培养的HCC1937细胞形态改变,大量细胞死亡、崩解,贴壁数量显著减少且与药物剂量有关。流式细胞术结果表明不同浓度粉防己碱对三阴乳腺癌HCC1937细胞24h早期凋亡率和晚期凋亡率有影响,凋亡率与药物浓度呈正相关。免疫组化检测Bax、Bc1-2表达在各组间差异无统计学意义,E-cadherin表达随粉防己碱浓度的增加呈现递增趋势,且与药物剂量相关。结论:首次发现粉防己碱在体外对三阴乳腺癌细胞HCC1937增殖有明显抑制作用,呈现出显著的剂量效应和时间效应。不同浓度粉防己碱干预三阴乳腺癌细胞HCC1937在24h后可诱导凋亡,早期凋亡率和晚期凋亡率与药物浓度呈正相关。三阴乳腺癌细胞HCC1937中Bcl-2、Bax的表达在不同粉防己碱药物浓度干预下无明显变化,差异无统计学意义,说明其诱导凋亡可能由于其他作用机制。粉防己碱可有效升高三阴乳腺癌细胞HCC1937中E-cadherin的表达,为粉防己碱控制乳腺癌转移、复发提供了实验基础。
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