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目的：比较活BCG和灭活BCG对人外周血淋巴细胞和小鼠脾细胞的增殖作用；提取、分离、纯化和鉴定BCG的有效组分，通过分析有效组分对小鼠淋巴细胞增殖作用的影响，诱导小鼠淋巴细胞产生细胞因子的作用，诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生NO的作用来探讨其有效组分的免疫调节活性；通过检测其有效组分诱导的小鼠脾淋巴细胞和小鼠腹腔巨噬细胞对人膀胱癌细胞株T24细胞的杀伤活性和吞噬活性来探讨有效组分的抗肿瘤机制，为膀胱癌的治疗开发一种疗效好、副作用少的生物制剂提供科学依据。
方法：1.采用MTT法测定活BCG和灭活BCG对人淋巴细胞和小鼠脾细胞的增殖作用。2.采用酶裂解法和超声波破碎法对活BCG进行裂解，提取其活性蛋白质，并用紫外比色法测定其蛋白纯度，用考马斯亮兰方法测定其提取物的蛋白含量，通过葡聚糖凝胶层析方法对BCG提取物进行组分分离并测定其分子量。进一步采用SDS-PAGE凝胶电泳方法对层析后的BCG提取物进行纯度及分子量的鉴定。3.采用MTT法分析BCG提取物BCGE1、BCGE2和BCGE3对小鼠脾细胞增殖作用的影响，并用ELISA方法检测经BCGE1、BCGE2和BCGE3作用后诱导小鼠脾细胞分泌IL-12、TNF-α和IL-4等细胞因子的含量；用Gress方法检测经BCGE1、BCGE2、BCGE3作用后诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生的NO水平。4.采用MTT法测定BCG有效组分BCGE2诱导的小鼠脾淋巴细胞对人膀胱癌细胞株T24细胞的杀伤活性以及小鼠腹腔巨噬细胞对人膀胱癌细胞株T24细胞的吞噬活性。
结果：1.体外增殖实验结果显示，活BCG和灭活BCG在浓度为3.6×103cfu/ml以下对小鼠脾细胞和人外周血单个核细胞无明显促增殖作用，而当浓度在3.6×103cfu/ml以上时则可明显地促进小鼠脾细胞和人外周血单个核细胞进行增殖(p＜0.01)，并呈良好的剂量效应关系。活BCG对小鼠脾细胞和人外周血单核细胞的增殖作用比灭活BCG的作用明显(p＜0.05)，并随着浓度的增加其差异越显著。活BCG和灭活BCG对小鼠脾细胞的增殖作用比人外周血单核细胞的增殖作用明显(p＜0.05)。
2.裂解活BCG提取其蛋白成分，经紫外吸收法测定其蛋白质纯度A280nm/A260nm为1.75，用考马斯亮兰G250比色法测得提取物总蛋白含量为9.7mg/ml，提取物经分离纯化后可得三个组分BCGE1、BCGE2和BCGE3，其分子量分别为42.5kDa、36.3kDa和28.6kDa。
3.BCGE1在320μg/ml浓度以下对小鼠脾细胞无促增殖作用，也不能诱导小鼠脾细胞分泌细胞因子IL-12和TNF-α，在320g/ml浓度以上对小鼠脾细胞的增殖具有一定的促进作用(p＜0.05)，并能诱导小鼠脾细胞产生少量的IL-12、TNF-α(p＜0.05)，诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生NO(p＜0.05)。在浓度为640μg/ml时，BCGE1对小鼠脾细胞的增殖指数为1.35，诱导小鼠脾细胞产生的IL-12、TNF-α分别为96.87pg/ml和87.46pg/ml，诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生的NO为3.67g/ml。BCGE2和BCGE3在浓度为80μg/ml时就可以刺激小鼠脾细胞进行增殖和产生IL-12、TNF-α，以及诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生NO(p＜0.01)。在浓度为640μg/ml时，BCGE2对小鼠脾细胞的增殖指数为7.1，诱导小鼠脾细胞产生的IL-12、TNF-α分别为159.74pg/ml和128.94pg/ml，诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生的NO为8.21μg/ml(p＜0.01)。在浓度为640μg/ml时，BCGE3对小鼠脾细胞的增殖指数为4.66，诱导小鼠脾细胞产生的IL-12、TNF-α分别为128.76pg/ml和106.71pg/ml，诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生的NO为7.62μg/ml(p＜0.01)。因此BCGE2对小鼠脾细胞的增殖和诱导产生IL-12、TNF-α的作用，以及诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生NO的作用比BCGE1和BCGE3都强。BCGE1、BCGE2和BCGE3都不能诱导小鼠脾细胞分泌细胞因子IL-4。
4.BCGE2可体外诱导小鼠脾细胞对膀胱癌细胞株T24细胞的杀伤作用，在效靶比为20：1时对T24细胞的抑制率为42.31％，而对照组仅为13.32％，两者相比有非常显著性差异(p＜0.01)。经BCGE2体外诱导的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性明显增强，在效靶比为20：1时其抑制率为50.93％，而对照组仅为12.62％，两者相比有非常显著性差异(p＜0.01)。
结论1.活BCG和灭活BCG对小鼠脾细胞、人外周血单个核细胞的增殖活性都具有促进作用，且随着浓度的增加而增强；活BCG的促增殖作用比灭活BCG的作用显著。2.BCGE2和BCGE3是BCG的有效组分，能刺激小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞因子IL-12和TNF-等的分泌，但对IL-4的产生无诱导作用。BCGE2和BCGE3还能刺激小鼠腹腔巨噬细胞产生NO。3.BCGE2诱导的小鼠脾细胞对人膀胱癌细胞株T24的杀伤作用很显著，经其诱导的小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性也明显增加，且随着效靶比的增加而增强。