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这里建立了一种直接且连续的测定精氨酸激酶活性(合成磷酸精氨酸方向)的pH-比色法。在精氨酸激酶催化合成磷酸精氨酸的过程中会生成H+,所以添加复合指示剂到反应体系中并监测反应混合物在575nm的波长处的吸收值的降低就可以测定精氨酸激酶的活力。在这种条件下,精氨酸激酶催化生成磷酸精氨酸的反应的1个活力单位被定义为1分钟内催化产生1μmolH+所需精氨酸激酶的量。
本论文中还研究了甘油,山梨醇,葡萄糖和蔗糖对于盐酸胍变性的精氨酸激酶再折叠和复活过程的影响。除葡萄糖外,甘油,山梨醇和蔗糖能够促进失活精氨酸激酶的复性。在上述实验中,没有聚沉发生。排阻层析结果显示在多元醇辅助的再折叠过程中仍然有错误折叠的产物。多元醇的化学和物理性质可以解释这些现象。
生物体为了使其细胞能够抵御外界环境渗透压改变造成对细胞的损伤,会在细胞内积累一些小分子的有机化合物以使细胞内具有与外界相适应的渗透压,发挥这种保持细胞内渗透压功能的小分子有机化合物被称为渗压剂。三甲胺-N-氧化物就是这么一种属于甲基胺类化合物的渗压剂。三甲胺-N-氧化物具有提高蛋白质对热变性、脲变性和压力变性抵抗能力的作用。在本章中通过活力测定、内源荧光光谱分析、疏水性荧光染料结合荧光分析、圆二色谱分析等技术手段,发现三甲胺-N-氧化物不会显著破坏精氨酸激酶的结构和活力,但是会妨碍脲变性精氨酸激酶的稀释复活,三甲胺-N-氧化物的这种作用在一定程度上可以被脲所拮抗。高浓度的脲可以造成精氨酸激酶结构被破坏,也可以妨碍已经被脲所变性的精氨酸激酶在较高浓度脲溶液中的稀释复性,高浓度脲对精氨酸激酶的这些作用在一定程度上可以被三甲胺-N-氧化物所拮抗。这些结果表明不仅在蛋白质稳定性方面三甲胺-N-氧化物和脲具有一定的相互拮抗的作用,在蛋白质再折叠方面也具有一定的相互拮抗作用。