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产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是引起新生仔猪腹泻的重要病原,一直是养猪业的困扰,给养猪业造成一定的经济损失。我们于2013-2014年在江苏部分养猪地区及其周边地区,从临诊上疑似致初生仔猪腹泻(黄、白痢)的直肠棉拭及病死猪的十二指肠、空肠和回肠共分离鉴定出397株大肠杆菌,并对其血清型、肠毒素类型及黏附素类型进行鉴定。1江苏部分地区及周边地区致初生仔猪腹泻大肠杆菌的分离鉴定本试验共分离出397株致初生仔猪腹泻大肠杆菌,其中64株未定型,5株自凝,328株大肠杆菌O血清型定型,定型菌株共覆盖了38种O血清型,其中以024、0101、0141、055、020和0149为主,共252株,占本研究定型菌株的76.83%(252/328),为本研究致初生仔猪腹泻大肠杆菌的主要流行血清型。本研究分离鉴定出的主要血清型中的024、055和0105在以往报道的初生仔猪腹泻大肠杆菌常见血清型中很少出现,可见024、055和0105有成为江苏地区致仔猪腹泻大肠杆菌主要O血清型的趋势。采用多重PCR对397株大肠杆菌分离株进行五种毒素基因(sta、stb、lt、stx2e、eaeA)的检测。结果显示：397株大肠杆菌分离株中共有171株检测出毒素基因,毒素基因的检出率达43.07%(171/397)。根据检测结果可将其分为13种毒素基因组成类型,其中以sta+、lt+、stb+、stx2e+为主要的肠毒素类型,分别有93、22、14和8株。应用兔回肠结扎试验乳鼠灌胃试验和Vero细胞毒性试验分别对部分菌株(主要为024血清型分离菌)的It、sta、stx2e三种毒素基因的表达进行检测。检测结果表明,024分离菌的毒素基因均能表达,表现出其毒力。应用玻板凝集试验和D-甘露糖抵抗血凝试验(MRHA),对397株大肠杆菌分菌株进行4种黏附素(F4、F5、F6、F41)的鉴定,共检测出37株大肠杆菌有黏附素的表达,检出率为9.32%(37/397),37株大肠杆菌分别表达一种或两种黏附素。本研究分离鉴定共有五种黏附素类型F4+、F5+F41+、F4+F5+、F41+和987P+,分别检出11、10、7、6和3株。对所分离到的397株大肠杆菌O血清型、毒素类型及黏附素类型鉴定结果进行相关性分析：171个携带毒素基因的菌株共覆盖了17个血清型,其主要血清型为024、0141、0149、0101、020和0105,分别拥有57、22、15、9、9和7株。024主要毒素基因类型为sta、lt、stx2e+eaeA分别占024血清型毒素基因阳性菌的59.65%(34/57)、10.53%(6/57)、8.78%(5/57)；0149大肠杆菌毒素基因型主要为stb和stb+stx2e,分别占其毒素基因阳性株的75%(12/15)和25%(3/15)；0101毒素基因型为sta和stx2e;O20的毒素基因类型主要为sta,占该血清型毒素基因阳性株的88.89%(8/9)；0105的毒素基因类型主要为sta,占该血清型毒素基因阳性株的71.43%(5/7)。37株黏附素表达的阳性菌中共有34个分离菌黏附素和毒素基因均呈阳性,可表现出13种组合形式,其中0149共14株,其毒力因子有三种组合形式：stb/F4+F5+、stb+/F41+和stb+stx2e+/F5+F41+,分别有7株,5株和2株；而024的毒力因子组合形式有sta+/F4+(2株)、stb+/F4+(2株)、lt+/F5+F41+(1株)、sta+stb+/F4+(1株).sta+lt+stx2e+/F5+F41+(1株)2O24ETEC分离株人工感染试验3头刚出生未经母乳喂养的商品仔猪分别经口感染024LYG129株(stb/F5+F41+).O24LYG141株(lt+/F141+).024YC267株(stb+/F4+F5+),攻毒后观察仔猪精神状态、采食、腹泻情况等变化,每3小时采集一次棉拭子,攻毒后72小时扑杀。试验结果表明,在攻毒15小时后,3头仔猪均出现不同程度的腹泻,最初是黄色稀粪,然后转而水样腹泻,脱水,消瘦。其中YC267攻毒猪腹泻严重于其他两组,攻毒24小时后死亡,并从心血中分离到攻毒菌株。攻毒12小时后均能从粪便中持续分离出大肠杆菌,其O血清型、毒素型及黏附素型与攻毒株一致。因此,024血清型的ETEC能够引起仔猪腹泻,具有明显的致病性。