【摘 要】
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滇黄精（Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.）是我国著名的药食同源植物,享有“血气双补之王”的美誉,在云南蕴藏量大,研究开发前景广阔。为了促进滇黄精资源的深度开发与高值化利用,本论文主要研究不同炮制方法对滇黄精微观结构、化学成分和抗氧化活性的影响,并采用网络药理学研究方法解析九蒸九制滇黄精改善2型糖尿病的潜在分子机制。主要方法及结果如下:（1）采用激光共聚焦扫描
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滇黄精（Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.）是我国著名的药食同源植物,享有“血气双补之王”的美誉,在云南蕴藏量大,研究开发前景广阔。为了促进滇黄精资源的深度开发与高值化利用,本论文主要研究不同炮制方法对滇黄精微观结构、化学成分和抗氧化活性的影响,并采用网络药理学研究方法解析九蒸九制滇黄精改善2型糖尿病的潜在分子机制。主要方法及结果如下:（1）采用激光共聚焦扫描显微镜（Confocal Laser Scanning Microscope,CLSM）观察炮制前后滇黄精样本,结果显示九蒸九制对滇黄精形态微观结构影响较大,蛋白与淀粉信号强度较弱。扫描电子显微镜和傅里叶红外光谱研究结果表明不同炮制方法对滇黄精水提物冻干粉和多糖提取物冻干粉影响较大:新鲜滇黄精水提物结构表面粗糙,由大小不一、形状不规则的小颗粒聚集而成,排列缜密。滇黄精炮制品水提物由于经过了水蒸或酒蒸、烘干等过程,颗粒结构呈不规则的块根状,性状变化多端,排列松散。与水提物不同的是,新鲜滇黄精多糖提取物、酒蒸滇黄精多糖提取物与九蒸九制滇黄精多糖提取物结构表面呈不规则的碎片状或脊状条形。水蒸滇黄精多糖提取物结构表面由小颗粒聚集为凹凸不平的球状或不规则状。九蒸九制滇黄精水提物中分子在1500～3500 cm-1波长范围内对红外光的吸收显著低于其他三种水提物。新鲜滇黄精多糖提取物中分子在400～4000 cm-1波长范围内对应波长处对红外光的吸收强于其他三种提取物。（2）不同炮制方法能显著改变滇黄精水提物中总酚、总糖及微量元素含量。九蒸九制滇黄精水提物中总酚含量最高,为0.0014%,其次是新鲜滇黄精水提物（0.00023%）、酒蒸滇黄精水提物（0.00028%）和水蒸滇黄精水提物（0.00019%）。滇黄精经过炮制后水提物中多糖含量显著降低,这可能是在高温、烘干等炮制过程中粘液质大量被除去,水溶性多糖水解或焦化的结果。不同炮制方式后滇黄精中Fe、Mg、Zn、Se、Cu、Mn、Co、Pb及Hg含量存在明显差异,其中九蒸九制滇黄精中Fe、Mg、Zn和Mn含量较高。（3）采用固相微萃取气相色谱-质谱联用技术对炮制前后不同水提物中的挥发性成分定性与定量分析,证实炮制过程对滇黄精挥发性化学成分组分影响巨大,特殊成分如苯乙醇、2,3-丁二醇、壬醛及5-羟甲基糠醛等的出现使得炮制滇黄精的香甜味更加浓厚。超高效液相色谱质谱联用分析鉴定出炮制前后不同水提物中1017种代谢物,主要包含氨基酸、酚酸类、黄酮类、生物碱等。炮制前后滇黄精水提物化合物种类及含量存在显著差异,尤其是九蒸九制与新鲜滇黄精及其他2种滇黄精炮制品的差异极大,富含瑞香素、隐绿原酸、鸢尾黄素及咖啡酸等具有抗氧化生理活性的代谢物。（4）联合ABTS·+自由基清除能力、DPPH自由基清除能力、羟基自由基清除能力及还原力测定结果发现,九蒸九制滇黄精水提物及其多糖提取物的抗氧化活性最强,为九蒸九制体内抗氧化及降血糖奠定依据。采用网络药理学研究方法,通过TCMSP数据库检索九蒸九制滇黄精物质成分差异倍数≥20倍新鲜滇黄精的物质以及其特有的物质成分（即九蒸九制滇黄精中独有而另外3种样本中不含有的成分）,作为作用靶点,探究九蒸九制滇黄精改善2型糖尿病的作用机制。结果表明,水杨酸、瑞香素、鸢尾黄素、L-谷氨酸等多个关键生物活性成分,作用于多个与糖尿病相关靶点PTGS2、PTGS1、MAPK1、NFKB1、TNF等,通过PI3K-Akt信号通路、FOXO信号通路及MAPK信号通路对氧化应激关键基因、糖脂代谢相关基因进行调控,进而促进β细胞胰岛素的分泌。综上,不同炮制方法对滇黄精微观结构、营养功能性成分、抗氧化活性方面均存在明显差异。九蒸九制或可通过改变滇黄精微观形态结构和代谢物组成进而显著提升功能活性,其特有化学成分更能够有效靶向调控氧化应激和糖脂代谢基因,改善2型糖尿病。本研究为滇黄精核心特征物质的功效机制探究与验证提供新思路,有助于滇黄精营养食品或保健品的开发提供理论和技术支撑。
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