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硬脂酰辅酶A脱氢酶-1（stearosyl coenzyme A dehydrogenase-1,SCD-1）是调控肝细胞合成单不饱和脂肪酸的限速酶，对畜禽机体脂肪沉积有重要影响。Ca2＋是机体不可或缺的重要离子，对机体各项生理功能具有重要调控作用，也是参与家禽蛋壳形成过程中最主要的成份，直接影响蛋壳质量。前人的研究结果表明，Ca2＋浓度的变化能影响脂质的合成代谢。但有关畜禽Ca2＋、脂质和调控脂质代谢相关基因的相互关系缺乏报道。因此，阐明家禽子宫上皮细胞中钙、脂质和SCD-1基因过表达之间的相关性，探讨家禽SCD-1基因影响子宫上皮细胞Ca2＋分泌的调控作用，对提升家禽蛋壳品质有重要意义。为此，本研究开展鸭SCD-1基因对子宫上皮细胞Ca2＋的调控效应及其启动子活性研究，取得如下结果： 1.根据GenBank登录号（NW_004677643.1）中SCD-1基因序列设计引物，扩增SCD-1基因启动子并直接测序，启动子软件分析结果显示：SCD-1基因启动子（位于基因组g.951648~g.952634区域）存在1个CAAT-box和1个GC框，存在TFIID、CAAC-binding-f、AP-2、ER和NF-1转录因子结合位点。 2.根据SCD-1基因启动子设计4条上游引物和1条下游引物，扩增4个不同长度的启动子片段，构建pGL3+启动子的表达载体，命名为pGL3-basic-S1（g.951648~g.952634）、pGL3-basic-S2（g.951648~g.952202）、pGL3-basic-S3（g.951648~g.951867）和pGL3-basic-S4（g.951648~g.951760），pGL3-control为对照，转染PC3细胞后，培养48h，用双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测4个启动子片段的相对荧光强度，结果显示：启动子的活性不随片段的递减呈现出规律性，启动子转录活性强弱顺序为pGL3-basic-S1>pGL3-basic-S4>pGL3-basic-S2>pGL3-basic-S3。 3.pGL3-basic-S1转染PC3细胞24h后更换为无血清培养基，同时用浓度梯度为0（对照）、10μmol?L-1、20μmol?L-1、30μmol?L-1、40μmol?L-1、50μmol?L-1的亚油酸和EPA作为外源刺激因子，继续培养24h，双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测启动子的相对活性，结果显示：亚油酸和EPA都显著提高了SCD-1启动子的转录活性（P<0.05），10μmol?L-1的亚油酸和EPA对SCD-1启动子转录活性的作用最强，总体表现出亚油酸对SCD-1启动子的转录活性强于EPA。 4.采用Ⅳ型胶原酶法，结合网筛过滤法、低速离心法和差速贴壁法分离获得产蛋高峰期鸭子宫上皮细胞，通过间接免疫荧光鉴定，表明分离出的细胞为目的细胞。细胞培养至18h开始大量贴壁，培养至48h贴壁细胞呈不规则形态生长，培养至72h呈现出旋涡状的细胞团，培养至96h呈现子宫上皮细胞典型的铺路石状。 5.根据鸭SCD-1基因mRNA序列设计1对上游携带Flag标签的引物，以鸭肝脏cDNA为模板进行扩增，测序验证，构建pcDNA3.1（+）+SCD-1+Flag真核过表达载体，转染鸭子宫上皮细胞，Flag标签检测试剂盒检测SCD-1基因的过表达量，Fluo-3/AM钙离子荧光标记法检测子宫上皮细胞内Ca2＋，脂质指标测定试剂盒检测子宫上皮细胞的脂质含量，相关性分析结果显示：SCD-1基因过表达与TG及HDL呈负相关关系，与Ca2＋、TC、VLDL、LDL、HDL呈正相关关系；Ca2＋与TG、LDL、HDL呈正相关关系，与TC及VLDL呈负相关关系，揭示SCD-1基因过表达能够促进子宫上皮细胞Ca2＋分泌和脂质合成与转运。