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目的阿霉素是肿瘤化疗中作为单药使用时抗瘤谱最广的化合物，在临床被广泛应用，但是，阿霉素的应用受到其心血管系统毒性副作用以及逐渐增加的肿瘤耐药性的限制。有证据表明，quercetin在肿瘤治疗中可能存在潜在的重要价值。本试验即通过人肝癌细胞SMMC7721、QGY7701，研究quercetin对阿霉素的协同作用，希望quercetin可以增强阿霉素的抗癌作用，从而可能降低阿霉素的用量。方法1．MTT法测定细胞药物敏感性细胞用含10％小牛血清的RPMI-1640培养液配成单个细胞悬液，以每孔5×10~3个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积200μl培养过夜，次日换液，加入不同浓度药物至总体积为200μ1．。培养48小时，每孔加入MTT溶液(0.5mg／ml)20μl，37℃继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，每孔加入150μl．DMSO，振荡10分钟，使结晶物充分溶解。选择570nm波长，在酶联免疫检测仪上测定每个孔光吸收值，记录结果。2．细胞蛋白提取收集培养细胞，用PBS洗两次，依细胞量的不同，加入蛋白抽提液100-300μl，混旋20分钟后，15000rpm离心30分钟，去上清，-20℃保存，用于western blot。3．Western Blot电泳结束后揭胶，并将凝胶浸于适量Transfer buffer中，平衡30分钟。同时截取适当大小PVDF膜和2张3M滤纸，将PVDF膜先在无水甲醇中浸湿，然后同滤纸一同浸于Transfer buffer中，平衡10-15分钟，转膜，250mA，2小时(低温)。将转有蛋白的膜浸于含5％脱脂奶粉的TBST中封闭，4℃过夜。取出已封闭的膜，用TBST漂洗30分钟(10分钟×3次)，然后浸于1：500稀释的一抗(用含5％脱脂奶粉的PBS、pH7.4配制)中，摇床室温2小时，TBST漂洗30分钟(10分钟×3次)，再浸于1：1000稀释的二抗(用含5％脱脂奶粉的PBS、pH7.4配制)中，TBST漂洗30分钟(10分钟×3次)。取出膜，配制显色液(ECLA液1.5ml+ECL B液1.5ml)，加在膜上，保鲜膜封膜，固定在暗盒内，压片，分别于1分钟、3分钟、5分钟、10分钟洗片。结果1．Quercetin可增强阿霉素诱导的SMMC7721和QGY7701细胞凋亡。用一系列不同浓度的单独阿霉素处理，与相应浓度阿霉素加Quercetin(20μM)共同处理的细胞比较，1μM的阿霉素是临床可接受剂量，但对肿瘤细胞抑制效果较微弱(抑制率大约10％)，与20μM Quercetin共同作用后，对此两种细胞系的生长抑制明显增强(P＜0.05)，抑制率分别增强40％(SMMC7721)和30％(QGY7701)。2．Quercetin可增强阿霉素诱导的caspase活性。Western blot显示，单独Quercetin作用下，caspase-3无明显切割条带出现，单独阿霉素作用可见20-kDa条带，但未发现有进一步活性的p17亚单位条带。而Quercetin与阿霉素共同作用时，可见20-kDa和p17两条切割带。分析caspase-9的p37／p35切割带可以发现，Quercetin与阿霉素共同作用可以明显较阿霉素单独作用增强caspase-9的活性，但是caspase-8的切割条带没有明显差别。3．Quercetin增强阿霉素诱导的肝细胞Bel-xl／Bax介导的线粒体凋亡途径。Western blot显示，与单独作用的阿霉素相比，阿霉素与Quercetin协同作用时，可增强PUMA蛋白表达，而单独Quercetin作用时PUMA表达无增强。尽管不同处理下的Bcl-2蛋白表达无明显变化，但Quercetin与阿霉素协同作用时Bcl-xl蛋白表达水平有明显下降，而单独阿霉素作用则对Bcl-xl表达水平无明显影响。结论：Qercetin具有协同阿霉素抑制肿瘤细胞增殖的作用，可通过线粒体途径增强阿霉素诱导的肿瘤细胞凋亡过程。