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目的:通过研究梗阻性黄疸大鼠肝脏、心脏、肺脏中血红素氧化酶-1mRNA(HO-1mRNA)表达,测定大鼠血浆中一氧化碳(CO)含量,同时研究梗阻性黄疸患者肝脏中HO-1mRNA表达,探讨梗阻性黄疸时HO-1及其产物CO变化的机理,以及HO-1和CO对梗阻性黄疸患者受损肝脏功能的保护作用。 材料与方法: 1.标本来源 动物标本:健康雄性Wistar大鼠48只,体重260~300g,随机等分成4组,假手术对照组(CG),梗阻性黄疸7d组(7d)、梗阻性黄疸14d组(14d)和梗阻性黄疸21d组(21d),分别于术后7、14和21d取肝下下腔静脉血、门静脉血和肝静脉血。以肝素抗凝保存,备作测定CO之用,并取心脏血分离出血清,置于-20℃冰箱保存,备作测定血清胆红素之用。同时取肝脏、肺脏、心脏等组织标本,立即置于4%多聚甲醛固定,包埋切片,制片行HO-1mRNA表达检测。 临床标本:实验组为梗阻性黄疸患者23例,术中取肝组织标本,立即置于-80℃液氮中保存,待检组织从液氮取出后立即用4%多聚甲醛固定,包埋切片。对照组为同期行单纯胆囊切除术的慢性结石性胆囊炎患者25例,取材法同实验组。 2.研究方法 一般观察:石蜡标本切片以HE染色,光镜下观察胆管扩张、肝窦充血、纤维组织增生、炎性细胞浸润情况;用自动生化分析仪测定大鼠血清胆红素含量。 原位杂交法:检测大鼠肝脏、心脏和肺脏HO-1mRNA的表达,检测人体肝脏HO-1mRNA的表达。 双波长分光光度计法:测定大鼠肝静脉、门静脉及下腔静脉血浆中CO含量。 3.统计学方法:数据用均数士标准差((?)±s)表示,应用SPSS10.0统计软件包,采用F检验、q检验、t检验及直线相关分析,P<0.05有显著性差异,P<0.01有极显著差异。 结果: 1.实验研究结果 1.1 HO-1mRNA表达:正常大鼠肝脏无HO-1mRNA表达,梗阻性黄疸大鼠肝脏中HO-1mRNA表达上调,7d、14d和21d组平均染色指数分别为0.10、0.38和0.68,随着胆道梗阻时间延长,其表达呈上升趋势。7d组大鼠肝脏散在HO一lmRNA表达呈弱阳性,14d组和Zld组肝细胞中HO一lmRNA表达均较7d组明显增加,差异有显著性(P<0.01)。梗阻性黄疽大鼠心脏中仅在Zld组见有HO一lmRNA微量表达,对照组、7d组和14d组均无表达。正常组大鼠肺组织未见HO一lmRNA表达,7d组大鼠肺泡上皮细胞HO一lmRNA表达呈中度阳性,平均染色指数为 0.21,1 4d组可见支气管粘膜上皮细胞、血管内皮细胞中HO一lmRNA高表达,平均染色指数为0.36,而在Zld组其表达进一步增强,平均染色指数达0.58。 1.2正常及梗阻性黄疽大鼠血浆CO含量的变化:梗阻性黄疽各组肝静脉血浆中CO含量较CG组增高,以14d和Zld组升高更为明显(尸<0.01);14d组门静脉血浆中CO含量升高明显,与CG组比较差异有显著性(P<0.05);梗阻性黄疽各组肝静脉血浆中CO含量与同时间组门静脉血浆中CO含量相比均显著升高 (尸<0.01);肝下下腔静脉血浆中CO含量随胆道梗阻时间延长有所增高,但与CG组比较无显著性(尸<0.05)。7d、14d和Zld组肝静脉血浆中CO含量的增高与同时间组肝细胞中Ho一lmRNA表达的变化呈显著正相关(尸<0.01),相关系数丫分别为0.752、0.877和0.808。 2.临床研究结果 对照组肝细胞可见微弱HO一lmRNA表达,平均染色指数0.09,实验组肝细胞HO一lmRNA表达呈中重度阳性,梗阻性黄疽患者肝脏HO一lmRNA表达以门静脉周围肝细胞胞浆中最强,周边逐渐减弱。实验组平均染色指数为0.41,较对照组明显升高,差异有极显著意义(尸<0.01)。 结论:梗阻性黄疽大鼠肝脏HO一lmRNA表达增强,致肝静脉血浆中CO含量升高,这与梗阻性黄疽时肝脏功能受损、肝脏循环障碍有关。梗阻性黄疽大鼠肺脏HO一lmRNA高表达可能与梗阻性黄疽时血流动力学改变有关,结果有助于肺脏血流量的增加。 梗阻性黄疽患者肝细胞HO一lmRNA表达明显增强,有助于舒张肝脏血管、增加肝脏血流量、改善肝脏循环,从而有利于减轻梗阻性黄疽患者肝脏功能的损害。